草鱼呼肠孤病毒JX-NC09株的分离和鉴定

来源 :2010年中国水产学会学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhanlei753
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  2009年9月下旬江西省南昌市一龄、二龄草鱼大面积暴发出血病,在排除细菌和寄生虫感染可能性后,取具有典型症状的病鱼组织进行电镜观察,在脾、肾样品中发现大量病毒颗粒,病毒无囊膜,近球形,直径约70nm,形态与已报道的草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)相似。取病鱼肌肉、内脏研磨,组织液经离心、过滤除菌后进行攻毒实验和细胞感染实验,结果发现攻毒鱼大量死亡且出现典型出血症状,组织滤液感染草鱼肾脏细胞(CIK)后,盲传六代未出现明显细胞病变,但感染细胞固定后经电镜观察,细胞质内有大量病毒聚集,与病鱼组织切片观察到的病毒形态一致。根据GenBank上已提交的草鱼呼肠孤病毒S6序列设计引物,以新分离病毒株(暂命名为JX-NC09)的cDNA作为模板,扩增出特异性条带,核苷酸序列与GCRVHZ08株S6具有较高同源性,该株应为草鱼呼肠孤病毒。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果进一步揭示,JX-NC09株病毒基因组由11条dsRNA组成,呈现水生呼肠孤病毒基因组典型特征,但基因组带型与GCRV 873株和HZ08株存在差异,可能为草鱼呼肠孤病毒新成员。
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