【摘 要】
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本研究采用柔性Linker(GGGGS)和重叠延伸PCR方法将三个毒素基因，即副溶血弧菌的耐热型直接溶血素基因tdh、创伤弧菌的溶细胞毒素基因vvhA和拟态弧菌的热不稳定型溶血素基因vmhA的成熟蛋白基因片段进行串联，得到三联融合毒素基因tdh-vvhA-vmhA(命名为F7)。一致性比对分析与预计融合的基因序列一致性为99.6％.FT的开放阅读框架全长3225 bp，编码1074个氨基酸残基，预
【机 构】
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吉林大学人兽共患病研究所畜牧兽医学院人兽共患病研究教育部重点实验室 吉林长春 130062
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本研究采用柔性Linker(GGGGS)和重叠延伸PCR方法将三个毒素基因，即副溶血弧菌的耐热型直接溶血素基因tdh、创伤弧菌的溶细胞毒素基因vvhA和拟态弧菌的热不稳定型溶血素基因vmhA的成熟蛋白基因片段进行串联，得到三联融合毒素基因tdh-vvhA-vmhA(命名为F7)。一致性比对分析与预计融合的基因序列一致性为99.6％.FT的开放阅读框架全长3225 bp，编码1074个氨基酸残基，预测分子量为120.4kDa。将，7亚克隆至表达载体pET-22b(+)中，转化至E.coli BL21(DE3)中进行表达，经SDS-PAEG分析，融合蛋白分子量与预测的相符.终浓度为1mmol/L的IPTG，37℃诱导4 h，融合毒素蛋白表达量最高，经薄层扫描分析，此时融合毒素蛋白占全菌体蛋白的11.49％.三联融合毒素基因的成功克隆与表达，为进一步建立多种食物中毒性弧菌广谱、快速、特异的同步免疫学检测方法奠定基础.
其他文献
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目的：口蹄疫(FMD)是当前危害猪、牛、羊等偶蹄动物的重要传染病，为了有效防控消灭该病，我国采取的是以免疫为主的综合防控措施，制苗毒株的选择是疫苗生产过程中考虑的最重要因素之一，因此本文旨在筛选或构建一株低致病力，免疫原性与田间流行毒株相匹配的制苗毒株。方法：T7RNA聚合酶表达质粒，质粒p43-CHA90-LL由猪源O型口蹄疫制苗种毒p43-CHA90缺失Lpro构建而成。猪源流行毒株结构蛋白基
乙型脑炎(JE)是由流行性乙型脑炎病毒(JEV)引起的一种人畜共患的自然疫源性传染病。厄主要通过带病毒的蚊虫叮咬而传播，其中三带喙库蚊为主要媒介，猪是JEV的主要增殖宿主和传染源。JE给养猪业造成巨大的经济损失。在RT-PCR法的基础上，本研究根据GenBank上登录的JEV-E基因序列设计了内外2对引物，以猪、人JEV疫苗株为模板，经过疫苗株RNA的提取、反转录、两轮PCR扩增条件的摸索和优化，
结核病是常见的人兽共患细菌性传染病之一，给人类的健康以及畜牧业的发展带来了严重的危害。牛结核病被世界动物卫生组织列为B类疫病，是进出境检验检疫中重点检疫的动物疫病之一。且牛分枝杆菌还可以通过牛奶等途径感染人，因此对牛分枝杆菌及结核分枝杆菌的快速检测具有重要的公共卫生学意义。材料方法：根据Gen-Bank和相关文献，选择牛分枝杆菌和结核分枝杆菌相对保守且特异的核酸序列应用Primer Premier
本研究旨在表达出可溶性流行性乙型脑炎E蛋白，为乙脑的诊断提供抗原。根据GenBank上公布的JEV基因序列，设计带酶切位点的特异性引物，通过RT-PCR方法获得E蛋白基因，将其克隆测序后插入pBCX表达载体。PCR筛选和酶切鉴定后，提取阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG(O.5mM)诱导后，取样进行SDS-PAGE电泳和western blot分析。结果显示表达的融合蛋白大小为
PFGE是80年代出现的分析大分子DNA片段的新技术，检测的是整个细菌染色体上所有酶切位点的变化，从整体上反映不同菌株全部基因的相关性。本研究拟建立脉冲场凝胶电泳用于空肠弯曲菌的分子检测，为弯曲菌病溯源性研究和预防控制措施提供分子亚分型技术平台。
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2005年7月-2006年12月间，对医院腹泻病人，奶牛和鸡群空弯曲菌进行流行状况分析。结果显示，三类样品中，鸡肛门棉拭样品阳性率最高，为18.61％，30个鸡群中阳性率为86.67％;不同鸡群感染率悬殊较大，阳性率从0到73.3％。其次为奶牛样品，阳性率为7.77％，产奶牛、育成牛环境样品和阳性率分别为5.02％、0.32％和10.28％。医院腹泻病人粪便样品中，阳性率为4.83％，不同医院间感