7血清小分子肽的分离和生物活性检测

• 作 者: 徐倩;李璟;汪保和;
• 机 构: 湖南师范大学生命科学学院 湖南 长沙 410081
• 出 处: 中南地区第八届生理学学术大会
• 发表日期: 2012年期

　　目的：检测血清1k～3kDa超滤组分的生物活性,分离和纯化其中的小分子肽,为阐明血清肽组成分及其生理功能提供实验证据.方法：将血清作串联超滤,截取1 k～3kDa的浓缩组分.进行小鼠骨髓成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)及粒巨噬系组细胞(CFU-GM)集落生成实验、骨髓基质细胞培养,采用集落计数、细胞计数、MTT比色法和流式细胞技术,检测血清1k～3kDa超滤组分对细胞生长和活力的影响.进行血清1k～3kDa超滤组分的C18反相高效液相色谱(C 18 RT-HPLC)分离,分离获得的纯化肽进行质谱分析,所获质谱数据作蛋白质/肽信息库搜索鉴定.结果：CFU-GM集落形成实验显示,含血清1k～3 kDa超滤组分5％体积分数组的集落产率显著增高,10％体积分数组的集落产率与对照组之间的差异无显著性,15％、20％、30％超滤组分体积分数组的集落产率反而显著低于对照组.CFU-F集落形成实验显示,与对照组比,10％、15％、20％、30％体积分数组的集落产率显著减低；而集落之间的骨髓基质细胞显著增多.骨髓基质细胞在1k～3kDa血清超滤组分为20％的条件下培养48h后,G1期细胞百分率降低,S期细胞百分率增高.血清1～3kDa超滤组分的C 18 RT-HPLC图谱上有20多个215nm波长吸收峰,一级质谱检测发现27min与30.5min洗脱峰分别为1793Da和2062Da高纯度肽,这两种肽的二级质谱数据在蛋白质/肽库中未检索到对应信息.结论：血清1 k～3kDa超滤组分含有多种小分子肽,在体外培养条件下,这些血清成分对不同细胞具有选择性的促进或抑制增殖的作用,并有一定的量效关系.相对分子质量分别为1793Da和2062Da的血清肽可能是两种新发现的肽.本研究的结果为血清肽组及功能的深入研究提供有价值的参考.