【摘 要】
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[前言]间充质干细胞(MSCs)来源于胚胎发育早期中胚层和外胚层,具有多向分化潜能.在体外经诱导可分化为成骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞、神经细胞等,是组织工程种子细胞的
【机 构】
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中南大学湘雅医学院基础医学院生理学系,长沙410078
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[前言]间充质干细胞(MSCs)来源于胚胎发育早期中胚层和外胚层,具有多向分化潜能.在体外经诱导可分化为成骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞、神经细胞等,是组织工程种子细胞的重要来源.本实验体外分离培养脐带MSCs,根据其培养细胞形态、抗原表型表达及分化潜能来鉴定MSCs.[方法]取新鲜脐带经PBS清洗,冲去脐静脉及动脉内的残存血,将脐带剪碎至1mm3大小组织块,将组织块接种于含10％FBS的DMEM完全培养基培养.一周后换液,弃去非贴壁细胞,细胞融合达80％时传代.每3天换液一次,传至第3代时备用.倒置显微镜观察细胞形态学.取第3代细胞,计数绘制生长曲线.采用成骨、成脂诱导分化体系诱导第3代细胞向成骨细胞、脂肪细胞分化,并分别用茜素红染色法、油红0染色法进行成骨细胞、脂肪细胞形态学鉴定.流式细胞术检测细胞表面相应抗原的表达.[结果]①从脐带组织中分离的细胞,3天内大部分贴壁,细胞呈梭形,并可见多个细胞形成集落.传代后细胞主要呈长梭形,形态较原代均一,以平行排列生长为主,或呈漩涡状生长,符合MSCs的形态学特性.②生长曲线呈上升陡直的“S”形,接种后第1、2天为潜伏适应期,从第3天细胞开始增殖加速并进入对数生长期,第5、6天达到高峰,以后进入平台期.③第3代细胞经成骨、成脂诱导分化体系培养,经茜素红染色出现褐色钙结节,油红0染色可见细胞质内出现橙红色脂滴.④经流式细胞术检测,本实验分离得到的脐带MSCs表达CD13、CD129、CD44、CD105、CD106,不表达CD14、CD32、CD34、CD45,符合MSCs的生物学特性.[结论]从脐带可分离出MSCs,能在体外培养传代扩增且保持其低分化状态,通过其形态学,生长周期,免疫表型,体外诱导分化能力的研究表明,其符合MSCs的生物学特性.
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