九节茶ISSR反应体系的研究

• 作 者: 郑郁善;黄宇;荣俊冬;陈礼光;
• 机 构: 福建农林大学 福建省中药材GAP 工程技术研究中心,福建 福州 350002
• 出 处: 第二届中草药提取关键技术与提取物产业应用研讨会
• 发表日期: 2009年期

以九节茶叶片提取的基因组DNA为材料，对影响ISSR-PCR扩增效果的一些因素，诸如dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物用量、模板DNA用量、退火温度以及循环次数等指标进行筛选和优化。结果表明，20μL ISSR反应体系含：10×PCR Buffer、0.4mmol·L-1dNTPs、2U Taq DNA聚合酶、0.6μmol·μL-1引物、5ng模板DNA。PCR扩增程序为：94℃预变性2min，94℃变性30s，44.8℃退火30s，72℃延伸1 min，35个循环，最后72℃延伸7min，置4℃保存。应用该ISSR体系对10份九节茶种质进行了扩增，证实了该体系的适用性和稳定性。