赭曲霉甾体C11α羟化酶基因AOH的克隆鉴定

来源 :2014年全国生物技术与食品质量博士后学术论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong447
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  甾体药物是临床上应用广泛的一类重要药物,主要用于治疗类风湿性关节炎、哮喘、抗肿瘤以及生育控制.微生物甾体羟化反应是甾体药物生产的关键技术之一.C11α左旋乙基双酮是合成甾体激素药物的重要中间体.虽然赭曲霉(Aspergillus niger)对沃氏氧化物C11α羟化特异性强,但对左旋乙基双酮C11α羟化特异性低,产生40%副产物.为了探究赭曲霉对沃氏氧化物和左旋乙基双酮的C11α羟化反应特异性差异的遗传基础,利用赭曲对两种甾体的羟化活性都受底物高度诱导的特性,对诱导条件下的赭曲转录组进行了测序和qRT-PCR 分析,确立了候选羟化酶基因AOH.通过对AOH 定点敲除和在酵母中功能表达,证明了赭曲对左旋乙基双酮的C11α羟化反应低特异性是由该底物的结构决定的,而不是由于不同羟化酶作用的结果.
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