【摘 要】
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本文从E.Tenella扬州株纯化的配子体中提取总RNA,经RT-PCR扩增出Etgam22基因片段.将目的片段插入到pGEM-T-Easy载体,常规转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,蓝白斑筛选后,对经酶切和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序.以黄羽肉鸡为试验动物,以平均增重、相对增重率、病变记分与卵囊减少率等为评价指标,对重组蛋白的免疫保护效果进行了初步研究,并对其诱导的特异性免疫应答水平进行了检
【机 构】
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扬州大学兽医学院,江苏扬州,225009
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本文从E.Tenella扬州株纯化的配子体中提取总RNA,经RT-PCR扩增出Etgam22基因片段.将目的片段插入到pGEM-T-Easy载体,常规转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,蓝白斑筛选后,对经酶切和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序.以黄羽肉鸡为试验动物,以平均增重、相对增重率、病变记分与卵囊减少率等为评价指标,对重组蛋白的免疫保护效果进行了初步研究,并对其诱导的特异性免疫应答水平进行了检测.结果显示:重组蛋白免疫后均能诱导一定的细胞免疫和体液免疫水平,抗体水平、CD4+水平、CD8+水平等免疫指标均高于未免疫未攻虫组;与未免疫未攻虫组相比,重组蛋白免疫组在一定程度上能提高增重,降低病变记分和减少卵囊产量,其中又以重组蛋白中剂量组的免疫保护效果稍好,但均未达到卵囊免疫组的免疫保护水平.
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不同物种间密码子偏爱性存在一定差异，将影响到外源基因在宿主中的表达效率，可通过密码子优化提高外源基因的表达水平。fat-1基因和牛肌肉蛋白相关基因的最优密码子使用大多不一致，fat-1基因简并密码子的第3个碱基倾向于使用A、T，而在牛肌肉中倾向于使用C、G。本研究替换了fat-1在牛肌肉中的限速密码子，并加上了Kozark保护序列，以期获得高效表达fat-1基因的转基因牛。本研究构建的表达载体含有
本文经过PCR、酶切和测序鉴定之后，确定4个干扰质粒和2个靶质粒都已经构建好。转染后，在显微镜下观察到转染干扰载体的细胞表达了绿色荧光蛋白，而转染2个靶载体的细胞也表达了红色荧光蛋白，证明质粒都构建成功。干扰效率有待于进一步的验证。
应用饱和蔗糖溶液漂浮法对河南、山东、东北等地的1052只绵羊球虫感染情况及种类进行了调查,结果表明球虫总感染率为94.8％,对968份阳性样本中的球虫卵囊进行形态学鉴定,共检出12种艾美耳球虫,分别为阿撒他艾美耳球虫、巴库艾美耳球虫、小型艾美耳球虫、贡氏艾美耳球虫、类绵羊艾美耳球虫、颗粒艾美耳球虫、苍白艾美耳球虫、马耳西卡艾美耳球虫、温布里吉艾美耳球虫、错乱艾美耳球虫、槌形艾美耳球虫和浮氏艾美耳球
采用饱和蔗糖溶液漂浮法对河南8个地区、重庆云阳和安徽合肥共1126份山羊粪便样品进行检查,发现1070份球虫阳性样品,总感染率为95.03％.对813份阳性样本中的球虫卵囊进行形态学鉴定,共发现12种艾美耳球虫,分别为阿普艾美耳球虫、阿氏艾美耳球虫、艾丽艾美耳球虫、斑点艾美耳球虫、苍白艾美耳球虫、家山羊艾美耳球虫、柯察艾美耳球虫、克氏艾美耳球虫、妮氏艾美耳球虫、山羊艾美耳球虫、羊艾美耳球虫和约奇艾
为构建在体外稳定表达EtMIC3及EtAMA1的重组沙门氏菌菌株,筛选免疫保护力强的候选重组减毒沙门氏菌活载体疫苗方法:从鸡球虫RNA中反转录获得cDNA,然后扩增得到EtMIC3和EtAMA1基因.将这两个基因克隆到沙门氏菌表达载体pYA3342,电转到减毒沙门氏菌表达菌株x4550.筛选能够在体外稳定表达EtMIC3和EtAMAl蛋白的重组菌株.减毒的鼠伤寒沙门氏菌具有在肠道黏膜上皮细胞中定居
本研究主要目的是研究柔嫩艾美尔球虫组织蛋白酶L的基因和蛋白结构,揭示其原核表达规律.选用未孢子化的柔嫩艾美尔球虫houghton株,通过与弓形虫的cathepsinL进行BLASTP找到其保守结构域,利用RT-PCR和RACE技术,分别获得其保守结构域和cDNA的5’和3’端序列,并将其重组于pET28-a(+),经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转入大肠杆菌Transetta(DE3)进行诱导表达.
本研究旨在调查奎屯地区奶牛养殖场奶牛球虫感染与流行情况,并根据调查结果进行驱虫方案的设计,为奶牛球虫病的防治提供理论依据.试验选取奎屯不同地区的5个规模化奶牛养殖场,直肠采集2:3月龄、6月龄、1-2岁、5-6岁四个年龄段奶牛的粪便,分别为:91份、95份、73份、31份,共290份；采用饱和蔗糖水漂浮法和离心沉淀法进行阳性样品的确定、卵囊的搜集；2.5％的重铬酸钾进行孢子化并置于室温下进行卵囊的
Toxoplasma gondii and Eimeria mitis are closely related apieomplexan parasites.The surface antigen 1 of T.Gondii (TgSAG 1) is a major immunodominant antigen and is considered to be a good candidate fo
本试验利用显微操作的方法分离斯氏艾美耳球虫和中型艾美耳球虫单个卵囊,利用阴离子去污剂SDS和蛋白酶K孵育,并结合液氮冻融的方法对卵囊进行裂解.继而利用引物延伸预扩增技术对裂解后获得的单卵囊基因组进行随机扩增.最后利用11个兔球虫种ITS-l基因的特异性引物对PEP产物进行巢式PCR鉴定.结果表明,结合PEP技术,成功建立了单卵囊PCR鉴定方法.该方法能够实现在单个卵囊基础上对具有种鉴定意义的靶基因
In the present study,we determined the complete mitochondrial DNA (mtDNA) sequence of Eimeria magna from rabbits for the first time,and compared its gene contents and genome organizations with that of