【摘 要】
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为构建在体外稳定表达EtMIC3及EtAMA1的重组沙门氏菌菌株,筛选免疫保护力强的候选重组减毒沙门氏菌活载体疫苗方法:从鸡球虫RNA中反转录获得cDNA,然后扩增得到EtMIC3和EtAMA1基因.将这两个基因克隆到沙门氏菌表达载体pYA3342,电转到减毒沙门氏菌表达菌株x4550.筛选能够在体外稳定表达EtMIC3和EtAMAl蛋白的重组菌株.减毒的鼠伤寒沙门氏菌具有在肠道黏膜上皮细胞中定居
【机 构】
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山东农业大学动物医学学院;山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室 山东农业大学动物医学学院;山东省
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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为构建在体外稳定表达EtMIC3及EtAMA1的重组沙门氏菌菌株,筛选免疫保护力强的候选重组减毒沙门氏菌活载体疫苗方法:从鸡球虫RNA中反转录获得cDNA,然后扩增得到EtMIC3和EtAMA1基因.将这两个基因克隆到沙门氏菌表达载体pYA3342,电转到减毒沙门氏菌表达菌株x4550.筛选能够在体外稳定表达EtMIC3和EtAMAl蛋白的重组菌株.减毒的鼠伤寒沙门氏菌具有在肠道黏膜上皮细胞中定居繁殖的能力,因此能够在细胞内释放抗原递呈至细胞表面并诱导CD4+和CD8+T细胞反应,与球虫有相似的抗原加工和递呈过程.成功构建了能稳定表达鸡艾美尔球虫EtMIC3及EtAMA1蛋白口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌菌株,为研究鸡球虫口服基因工程疫苗奠定了基础.
其他文献
本研究以转人乳铁蛋白(human lactoferrin,hLF)牛奶为检测对象，利用多种蛋白检测的方法，对牛奶中的hLF蛋白进行了定性定量检测，并研发能够实现快速检测的检测产品，旨在在转基因动物中建立有效的蛋白质检测方法，为转基因动物安全评价体系的建立提供技术支持。
通过细菌双杂交筛选得到了6个单锌指库和两个3锌指库;从两个3锌指库中分别PCR扩增得到左右两侧锌指，构建至酵母表达载体，在酵母中验证得到两对有效的ZFN;利用T2A序列将左右两侧ZFN，分步构建至pAdTrack-CMV上得到了pAdTrack-ZFNL-T2A-ZFNR穿梭载体，用PmeI线性化pAdTrack-ZFNL-2A-ZFNR载体并纯化后，与pAdEasy-1进行重组得到pAdEasy
本研究旨在应用开源式(Oligomerized pool engineering,OPEN)方法筛选具有较高特异性和亲和性的靶向结合猪CFTR基因的锌指蛋白(Zinc finger protein,ZFP)，构建锌指核酸酶表达载体，并在酵母细胞水平检测CFTR锌指核酸酶的特异性和剪切效率。
在本实验中,作者对电脉冲导入法所需的条件进行了优化,并与显微注射法进行了比较.以其找出电脉冲导入法的最佳导入条件，为大批量生产转基因鱼奠定基础。
本实验克隆了KAP6.1启动子前482bp的序列并利用tfsearch在线软件进行调控原件分析预测，发现在延长区域有1个SRY顺势转录调控位点和C/EBPAP-1、CAP转录调节因子结合位点，还存在一个与上皮细胞分化相关转录因子skn-1的结合位点。接下来将利用延长后的1524bp启动子构建表达载体，并转染绵羊皮肤细胞进行检测，期望延长后的启动子能够提高转录效率。
本文介绍抗菌肽CAMA-syn能够在牛成纤维细胞BEF和鼠巨噬细胞RAW 264.7中表达，MSP启动子能够保证CAMA-syn的靶向性表达。哺乳动物细胞表达的抗菌肽CAMA-syn具有一定的抑菌生物活性，尤其是巨噬细胞特异性表达CAMA-syn能够抑制细菌的生长，这对于使用在淋巴系统中表达抗菌肽CAMA-syn的策略来制作转基因动物抵抗细菌感染性疾病具有重要意义。
不同物种间密码子偏爱性存在一定差异，将影响到外源基因在宿主中的表达效率，可通过密码子优化提高外源基因的表达水平。fat-1基因和牛肌肉蛋白相关基因的最优密码子使用大多不一致，fat-1基因简并密码子的第3个碱基倾向于使用A、T，而在牛肌肉中倾向于使用C、G。本研究替换了fat-1在牛肌肉中的限速密码子，并加上了Kozark保护序列，以期获得高效表达fat-1基因的转基因牛。本研究构建的表达载体含有
本文经过PCR、酶切和测序鉴定之后，确定4个干扰质粒和2个靶质粒都已经构建好。转染后，在显微镜下观察到转染干扰载体的细胞表达了绿色荧光蛋白，而转染2个靶载体的细胞也表达了红色荧光蛋白，证明质粒都构建成功。干扰效率有待于进一步的验证。
应用饱和蔗糖溶液漂浮法对河南、山东、东北等地的1052只绵羊球虫感染情况及种类进行了调查,结果表明球虫总感染率为94.8％,对968份阳性样本中的球虫卵囊进行形态学鉴定,共检出12种艾美耳球虫,分别为阿撒他艾美耳球虫、巴库艾美耳球虫、小型艾美耳球虫、贡氏艾美耳球虫、类绵羊艾美耳球虫、颗粒艾美耳球虫、苍白艾美耳球虫、马耳西卡艾美耳球虫、温布里吉艾美耳球虫、错乱艾美耳球虫、槌形艾美耳球虫和浮氏艾美耳球
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