人分化抑制因子Id-3基因在大肠埃希氏菌中的高效表达及其多克隆抗体的制备

• 作 者: 林燕[1]童铁钢[2]穆丹梅[3]白宇[2]杨木蕾[4]郑敏[4]吴东来[2]
• 机 构: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150001；黑龙江大学生命科学院，黑龙江 哈尔滨 150080
• 出 处: 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会
• 发表日期: 2008年期

从乳腺癌组织中提取总RNA，用RT-PCR扩增出Id-3的编码序列，克隆至表达载体pGEX-6P-1中，重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定证明，Id-3基因已正确克隆至pGEX-6P-1中，在大肠杆菌中经IPTG诱导表达，获得相对分子量为39000GST-Id-3融合蛋白，SDS-PAGE分析表达产物，Westernblot检测重组抗原的免疫原性。通过亲和层析法纯化表达的GST-Id-3融合蛋白，并以此为抗原制备多克隆抗体。ELISA和琼扩试验鉴定所制备的多克隆抗体可以与GST-Id-3融合蛋白发生特异性反应。Id-3基因在大肠杆菌中的成功表达及制备的多克隆抗体，为检测Id-3及其在各种组织中的表达水平提供了一种检测途径，也为分析Id-3分子结构、抗原表位和生物学功能奠定了基础。