【摘 要】
：
本研究应用猪瘟病毒(CSFV)及北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)特异性引物和TaqMan水解探针，建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测CSFV和PRRSV的复合荧光定量RT-PCR方法。该方法可检测到3.2TCID50的猪瘟病毒和1.8TCID50的北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒，比常规PCR方法敏感性高50倍以上。用复合荧光定量RT-PCR方法对155份现地样品进行检测，73份为
【机 构】
：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/ 猪传染病研究室，黑龙江 哈尔滨 150001；新疆农业大学 动物医学院，新疆 乌鲁木齐 830052
【出 处】
：
中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会
论文部分内容阅读
本研究应用猪瘟病毒(CSFV)及北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)特异性引物和TaqMan水解探针，建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测CSFV和PRRSV的复合荧光定量RT-PCR方法。该方法可检测到3.2TCID50的猪瘟病毒和1.8TCID50的北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒，比常规PCR方法敏感性高50倍以上。用复合荧光定量RT-PCR方法对155份现地样品进行检测，73份为CSFV阳性，16份为PRRSV阳性，与常规RT-PCR的符合率高达99.4％。该复合荧光定量RT-PCR方法敏感、特异、重复性好。
其他文献
本研究采用低致病力禽流感病毒(LPAIV)H9N2亚型A/Chicken/Shanghai/10/99(SH/10/99)和A/CK/Guangxi/10/99(GX/10/99)毒株作为免疫原,免疫8周龄BALB/C小鼠,用血凝抑制试验(HI)方法筛选和有限稀释法克隆纯化,最后获得十株H9亚型HA特异性单抗细胞株:其中SH/10/99作为免疫原的有四株:A3、B/D12、A11/C6、A/B3;
为探讨密码子及表达载体优化的H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对鹅的免疫保护效力,将pCAGGoptiHA5以100μg剂量加强免疫4周龄鹅,同时设油苗免疫对照组和空白对照组,加强免疫2周后用100LD50的HPAIVA/Duck/ShanghaiNanhui/16/2004(H5N1([DK/SHNH/1604(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,分别于攻毒后第3
对HA基因密码子及表达载体优化的H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5的免疫效果进行了研究.pCAGGoptiHA5分别以100μg和10μg剂量一次或加强免疫3周龄SPF鸡,单次免疫后4周以同样剂量和途径加强免疫,单次免疫后4周、加强免疫后2周后分别用100LD50的HPAIVA/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[Gs/GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,
以犬细小病毒基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增了全长VP1基因,PCR产物经纯化和NotⅠ/BamHⅠ双酶切后与同样处理的真核表达载体pIRES进行连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选了真核重组表达质粒pIRESVP1,并进行了序列测定.6只9月龄犬分别接种不同剂量的pIRESVP1或空质粒及生理盐水,8w接种一次,每次接种前采血,测定血清的血凝抑制效价,第二次免疫后即可检测到较高的血清效
根据犬瘟热病毒(CDV)血凝素基因(H)的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,提取CDV弱毒疫苗株的总RNA后,进行RT-PCR,PCR产物经纯化后与T载体进行连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选反向插入的重组质粒,用HindⅢ酶切,经Klenow补平,再用BamHⅠ将H片段切下并回收后克隆到BamHI/EcoRⅤ双酶切的真核表达载体pIRES中,得到重组质粒pIRCDV-H并进行了序列测定.免
为了研究我国犬瘟热病毒(CDV)变异情况,收集了我国不同地区、不同时间及物种犬瘟热病料,利用RT-PCR的方法扩增了CDV的附着蛋白(H)基因,将每个毒株各4个阳性PCR片段纯化后,直接进行测序,拼接后得到了H蛋白的全基因序列,H基因全长均为1946bp,编码607个氨基酸.对推导的氨基酸序列与以前测定的毒株及GenBank中不同动物CDVH基因序列进行了比较发现,疫苗株Convac和Onders
根据犬腺病毒(CAV)纤突基因序列,设计合成了4对引物,对我国不同地区犬和其它动物可疑腺病毒感染病料中,利用我们建立的PCR方法扩增犬CAV-1和CAV-2纤突基因并进行序列测定和氨基酸分析,并分别与GenBank中CAV-1标准强毒株(RI261)和CAV-2标准强毒株(TorontoA26/61)的纤突蛋白基因序列进行了比较,结果表明:我国流行的CAV-1株与标准强毒RI261株差异相对较大,
为确定重组牛白细胞介素-2(rbIL-2)对猪繁殖与呼吸综合征(猪蓝耳病)疫苗的免疫增强作用,分别利用巴马小型猪和杜长上杂交肉猪(断奶初期)进行了猪蓝耳病弱毒疫苗接种时的牛IL-2注射试验.试验证明:rbIL-2制品对蓝耳病弱毒疫苗具有良好的免疫增强作用,牛IL-2的使用可以提高猪蓝耳病抗体效价54％～164％。
本研究以纯化的原核表达猪传染性胃肠炎病毒N蛋白为诊断抗原，建立了猪传染性胃肠炎病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法，将其命名为rnTGE-ELISA。该抗原不与其他常见10种猪病的阳性血清发生交叉反应，批内和批间重复性试验的变异系数均小于15％；对仔猪免疫后不同时间的血清检测结果表明rnTGE-ELISA与纯化病毒ELISA符合率达95.0％；rnTGE-ELISA相对于VN试验的敏感性为96.3
小反刍兽疫(PPR)是副粘病毒科麻疹病毒属小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的以发热、口炎、腹泻、肺炎为特征的急性接触性传染病，本病一年四季均可发生，但多雨季节和干燥寒冷季节多发。山羊和绵羊是本病唯一的自然宿主，山羊比绵羊更易感，且临床症状比绵羊更为严重。山羊不同品种的易感性有差异。鹿、野山羊、长角大羚羊、东方盘羊、瞪羚羊、驼可感染发病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告疾病，我国将其列为一类