口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

来源 :第二届全国人畜共患病学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nongfeng4
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用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒(FMDV)基因组5非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其结构蛋白VP1基因,将其分别克隆至双顺反子表达载体pIRES中,构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及VP1基因已正确地插入到pIRES中,编码序列及插入方向均正确。用脂质体介导法将双效表达质粒导入BHK-21细胞后,经RT-PCR、实时荧光定量PCR检测表明双效表达质粒中的ASCN在细胞中得到了有效转录,mRNA的表达量达到了1.27x106个拷贝/μL。;经夹心ELISA及间接免疫荧光标记等试验表明VP1结构蛋白基因在BHK-21细胞中得到了表达,具有良好的生物学活性。双效质粒pASCN-IR-VPI转染IBRS-2细胞24h后,按100TCID50/0.1mL的量接FMDVOMⅢ毒,结果该质粒能够明显地抑制FMDV的复制,使病变时间推迟约16~18h,接毒48h时的抑制率达到60%以上,蚀斑减少试验也证实了该双效质粒的病毒抑制作用。研究结果表明成功构建了FMDV双效表达载体,为进一步研究双效疫苗免疫效力提供了前期基础。
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