雪旺细胞复合PFTBA纤维蛋白水凝胶促进周围神经再生的效能及机制研究

来源 :首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:flnlucifer
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  背景:应用组织工程神经导管结合雪旺细胞来修复周围神经缺损,被认为是替代自体神经移植治疗和克服自体神经移植缺陷的最有效方法。然而,由于组织损伤后局部血管损伤造成的缺血、缺氧,神经导管内部的低氧环境很大程度上限制了雪旺细胞的活性,从而影响了其修复神经缺损效能的发挥。因此,应用含有增氧剂全氟三丁胺(perfluorotributylamine,PFTBA)的水凝胶作为雪旺细胞的载体,使其与神经导管复合,可能是一种更加有效和方便的解决方案,有望明显改善支架内部早期的缺氧环境,促进雪旺细胞的存活以及功能的发挥,从而促进外周受损神经的再生和功能恢复。目的:探讨PFTBA对体外雪旺细胞缺氧模型的保护作用,研究PFTBA水凝胶有机结合雪旺细胞,复合神经导管促进神经再生的效能和机制。方法:首先,我们基于PFTBA,制备一种富含PFTBA的纤维蛋白水凝胶,使其作用于培养在缺氧环境或者正常氧环境中的雪旺细胞,应用血气分析,CCK-8以及流式周期检测,确定含有不同浓度PFTBA的纤维蛋白水凝胶对雪旺细胞活性和功能的影响,同时,应用Transwell小室实验和RT-PCR对雪旺细胞的迁移和分泌功能进行评估。其次,我们将最适浓度的PFTBA水凝胶作为雪旺细胞的载体,与胶原-壳聚糖神经导管有机结合,制成神经导管修复材料,修复大鼠15mm坐骨神经缺损,通过行为学分析、神经电生理检测、荧光金逆行示踪、靶器官及再生神经远端的形态学分析(Masson染色、甲苯胺蓝染色、免疫荧光染色、透射电镜等)等方法评价神经再生和功能恢复情况。结果:在缺氧环境中,含有不同浓度PFTBA的纤维蛋白水凝胶早期放氧量不同,其中,浓度为10%的PFTBA水凝胶其放氧量可达到顶峰。同时,在缺氧早期,PFTBA对雪旺细胞的增值、分化、迁移、分泌等都有明显的保护作用。当应用含有最适浓度PFTBA水凝胶修复长节段大鼠坐骨神经缺损时,虽然自体神经的修复效果仍然最好,但是复合PFTBA水凝胶的神经导管与没有复合PFTBA水凝胶的神经导管相比,其种子细胞(雪旺细胞)的存活率明显提升。因此,复合有最优浓度的PFTBA水凝胶可以有效促进植入雪旺细胞的存活,使其生物活性得到发挥,从而为神经生长提供良好再生微环境,促进神经有效生长和功能恢复。结论:PFTBA水凝胶可以明显改善神经导管内部早期的缺氧环境,促进雪旺细胞的存活以及功能的发挥,促进周围神经的再生和功能恢复。
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