【摘 要】
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目的：软骨组织工程已被广泛用来实现体外软骨组织再生,并用来修复软骨缺损。软骨组织工程主要由软骨细胞、软骨支架和体外培养环境三部分组成。通过研究体外模拟体内关节
【机 构】
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中国人民解放军总医院,北京市海淀区复兴路28号,100853
【出 处】
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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会
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目的：软骨组织工程已被广泛用来实现体外软骨组织再生,并用来修复软骨缺损。软骨组织工程主要由软骨细胞、软骨支架和体外培养环境三部分组成。通过研究体外模拟体内关节软骨生长环境,为进一步提高组织工程软骨的仿生性及更好地修复损伤软骨提供理论实验依据。方法：2月龄新西兰大白兔,用于分离培养膝关节软骨细胞,取第二代细胞以1 ×106个/mL密度,接种于猪去细胞软骨基质支架上制备细胞-支架复合物。实验分为实验组和对照组,对照组单纯细胞支架复合静态培养,实验组于Instron生物反应器中培养,加以力学刺激(力学加载参数为3h/天,1Hz,压缩量为10％),两组分别以7天、14天、21天、28天四个时间点取材,行大体观察、力学检测、组织学检测及实时荧光定量PCR检测。结果：实验组细胞-支架复合物厚度、弹性模量及最大负荷均显著高于对照组,并且实验组与时间呈正相关。实验组组织切片HE染色均可见软骨细胞增殖及软骨陷窝形成,番红0染色见细胞-支架复合物的细胞外基质中有大量蛋白聚糖(GAG)形成,并与GAGs试剂盒检测结果相符。免疫组化 Ⅱ型胶原染色显示实验组均多余对照组,且实验组中21天时阳性最高。实时荧光定量PCR检测示,实验组COL Ⅱ表达均高于对照组,且实验组中21天时表达最高；COL Ⅰ表达实验组高于对照组,且实验组中呈递增趋势。结论：细胞-支架复合物通过生物反应器的力学加载,可以产生更多的胶原和GAG等细胞外基质成分,并增强其力学特性,使其更加复合人体软骨生长环境,并提高其与正常软骨的仿生性,从而使细胞支架复合物能更好的修复损伤软骨。
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