【摘 要】
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目的：克隆人乳腺珠蛋白(hMaM)基因,获得高纯度hMaM重组蛋白. 方法：从人乳腺癌组织提取总RNA,逆转录合成cDNA,设计特异引物,用PCR方法扩增获得目的片段,利用T/A克隆将PCR产物
【机 构】
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东南大学附属中大医院临床检验中心,中国,南京,210009
【出 处】
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第二届全国现代免疫诊断技术学术研讨会
论文部分内容阅读
目的：克隆人乳腺珠蛋白(hMaM)基因,获得高纯度hMaM重组蛋白.
方法：从人乳腺癌组织提取总RNA,逆转录合成cDNA,设计特异引物,用PCR方法扩增获得目的片段,利用T/A克隆将PCR产物插入pMD-18T载体;利用BamHI+XhoI双酶切方法将目的基因导入表达载体,阳性质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,通过IPTG诱导获得重组蛋白,并用His-SelectTM和Sephadex-G100进行纯化.
结果：用RT-PCR方法获得279bp的片段,克隆至T载体后经DNA测序,结果与预期序列一致.表达质粒转化大肠杆菌后经诱导获得27kD的目的蛋白,与预期分子量一致.表达产物最终纯化为一条带.
结论：成功克隆hMaM基因,并获得高纯度重组蛋白,为hMaM的深入研究打下基础.
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