【摘 要】
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研究狂犬病病毒(RV)神经营养因子受体P75(P75NTR)原核表达的抗原性及制备出多克隆抗体，为进一步研究RV的致病机制奠定基础.本研究采用RT-PCR从感染Flury株的NA细胞中克隆P75mR基因，选取P75NTR基因的418～681 nt和831～1080 nt的两个区域共513 nt编码171个氨基酸的区域，与pET-32a(+)重组构建原核表达载体，然后转化BL21(DE3)感受态细胞
【机 构】
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广西大学动物科学技术学院动物传染病实验室,南宁530005 广西大学动物科学技术学院动物传染病实验
【出 处】
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2016第六届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会第五届全国会员代表大会暨2016学术年会、中国微生物学会兽医微
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研究狂犬病病毒(RV)神经营养因子受体P75(P75NTR)原核表达的抗原性及制备出多克隆抗体，为进一步研究RV的致病机制奠定基础.本研究采用RT-PCR从感染Flury株的NA细胞中克隆P75mR基因，选取P75NTR基因的418～681 nt和831～1080 nt的两个区域共513 nt编码171个氨基酸的区域，与pET-32a(+)重组构建原核表达载体，然后转化BL21(DE3)感受态细胞进行表达，再以纯化的重组蛋白P75mTR免疫昆明小鼠制备本狂犬病病毒受体P75NTR抗体，并以Western blotting和间接免疫荧光技术(IFA)检测其抗原性.结果显示以原核表达载体pET-P75-513转化BL21(DE3)感受态细胞，经0.2 mmol/LIPTG诱导6h可获得较高表达量的P75NTrR重组蛋白，且主要以可溶性蛋白形式进行表达，可用NiNTA树脂分离柱进行纯化.经Western blotting和IFA检测，发现制备获得的抗P75NTR多抗能与NA细胞表面自然的P75NTR及转染BHK-21细胞表达的P75NTR发生良好反应，且抗体效价高，可达1∶16000.
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