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本文研究雷公藤多甙对大鼠精子膜流动性的影响。
资料与方法1.1雷公藤多甙所致的雄性大鼠不育模型GTW片剂是湖南协力制药的市售产品,以1﹪羧甲基纤维素钠(CMC)配成4mg/ml的悬浮液,4℃冰箱保存备用.成年雄性健康SD大鼠16只,由哈尔滨医科大学实验动物中心提供,体重180～200g.将16只SD大鼠随机分为GTW实验组和对照组,每组8只.实验组每日GTW20mg/kg(0.5ml/100mg)灌胃,对照组每日灌服等量的CMC.各组均每周6次.动物每周称重,并相应调整用药量,于喂药后第6周取材.
1.2主要试剂和设备(1)1,6-二苯基1,3,5,己三烯(DPH).(2)SOD和MDA试剂盒南京建成生物研究所提供.(3)RF-540型荧光分光光度计(日本岛津公司产品),超声粉碎仪.
1.3研究方法1.3.1取材GTW20mg/kg/d灌胃6周后,将大鼠断头处死,取双侧附睾去被膜及血管,置于生理盐水中剪碎,静置5分钟让精子充分游出,经300目滤网过滤.滤液1000rpm离心10分钟,弃上清液,加生理盐水洗涤,再离心弃上清,用于精子膜流动性的检测和MDA.SOD的检测.1.3.2大鼠精子膜荧光偏振度(P值)的测定和膜流动度(LFU)计算将大鼠精子用PBS液稀释制成单细胞悬液,与1,6-二苯基1,3,5,己三烯标记液混匀,置37℃温箱内,孵育30分钟,2000r/min离心2分钟洗涤两次,用分光光度计检测.激发波长(EX)362nm;发射波长(EM)432nm.用下列公式分别计算荧光偏振度(P值)、微黏度(η)及膜流动度(LFU):p=(Lvv-Glvh)/(Lvv+Glvh),其中Lvv-激发部分与荧光部分的偏振器相互平行时标本的荧光强度.Lvh-偏振器矢量方向相互垂直时样品的荧光强度.G-校正因子.η=2Pr/(046-Pr)式中0.46为常数.LFU=(Pmax/Pr-1)/PrPr为测定的荧光偏振度P值,Pmax代表P的理论极限值(Pmax=0.5),P值与LFU值呈反比关系。