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目的：探讨叶酸对N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)致哈萨克族食管上皮细胞DNA 损伤及DNA 甲基化水平影响的保护作用.方法：采用3×3 析因设计，将体外培养的哈族食管正常上皮细胞暴露于不同浓度叶酸(0.00μg/ml、0.40μg/ml、0.80μg/ml)和MNNG(0.00μg/ml、0.75μg/ml、1.50μg/ml)的培养基中，分别于48h、72h 和96h 三个时间点，采用单细胞凝胶电泳分析(SCGE)检测DNA 损伤水平，高效液相色谱法(HPLC)检测基因组DNA 整体甲基化水平，亚硫酸氢盐测序(BSP)法检测MTHFR、FRα基因甲基化状态.结果：随着叶酸浓度降低、MNNG 浓度增加及作用时间的延长：1.Tail DNA 含量、彗星尾长及Olive 尾矩增加，差异有统计学意义(P＜0.01)；2.哈族食管正常上皮细胞的整体甲基化水平降低，差异有统计学意义(P＜0.01)；3.哈族正常食管上皮细胞的MTHFR、FRα甲基化频率均升高，其中MTHFR 启动子区P1-1 片段、P1-2 片段及FRα启动子区P2-1 片段表现较为明显，差异有统计学意义(P＜0.01).结论：叶酸浓度降低对MNNG 致哈族正常食管上皮细胞DNA 损伤及DNA 甲基化有一定的促进作用，而保持充足的叶酸则对MNNG 的损害起到一定的保护作用.