团头鲂鳍条细胞系的建立、鉴定及初步应用

来源 :2012年全国博生研究生学术论坛——可持续的水产养殖:理论与实践 | 被引量 : 0次 | 上传用户:daxia3301
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  本研究用组织块贴壁法建立了团头鲂(Megalobrama amblycephala)鳍条细胞系,命名为MAF.在28℃下,培养于含有10%胎牛血清的M199培养液中,MAF细胞的生长分裂状态佳,细胞生长稳定,迄今已传至95代.每20代的MAF细胞在3-6月的冻存后复苏成活率为90-95%.第10代的MAF细胞染色体数目为48占62%,说明该细胞系属正常二倍体细胞系.12srRNA片段序列与其来源鱼类的发表序列几乎一致,表明MAF确实是来自于团头鲂这种鱼类.对60代的MAF细胞进行免疫荧光(抗体:pancytokeratin,desmin,fibronectin和Ki67),结果表明MAF细胞增殖能力强,呈现出上皮样和成纤维样混合状.病毒(弹状病毒SHRV,鲤春病毒SVCV,斑点叉尾鮰病毒CCV和草鱼呼肠孤病毒GCRV)对MAF细胞的敏感性实验表明,MAF细胞对SHRV, SVCV和CCV较敏感,出现典型的CPE,病毒滴度分别为108.2, 107.6和105.9 TCID50ml-1.且MAF细胞对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)胞外产物敏感.MAF细胞对重金属铜也很敏感,24 h半致死浓度为144.48 μmol/L.pEGFP-N1能成功传人到MAF细胞中,转染效率为5%.上述结果表明MAF作为体外体系能应用于病毒学、细胞生物学和遗传学等领域.
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