【摘 要】
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目的：克隆结核分枝杆菌Rv2031c基因，构建其原核表达载体，并进行表达、纯化及鉴定。采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Rv2031c基因片段。克隆入pMD18-T载体，序列测定正确后亚克隆入原核表达载体pPro—EXHTb，转化人E.Coli DH5 α，经IPTC诱导表达，SDS—PAGE分析后与抗His单抗进行Western—blot，以Ni—NTA亲和层析
【机 构】
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第四军医大学微生物学教研室,西安,710032
【出 处】
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第七次全国医学分子微生物学及生物技术研讨会
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目的：克隆结核分枝杆菌Rv2031c基因，构建其原核表达载体，并进行表达、纯化及鉴定。采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Rv2031c基因片段。克隆入pMD18-T载体，序列测定正确后亚克隆入原核表达载体pPro—EXHTb，转化人E.Coli DH5 α，经IPTC诱导表达，SDS—PAGE分析后与抗His单抗进行Western—blot，以Ni—NTA亲和层析纯化目的蛋白。PCR扩增获得的目的基因为435bp，与预期大小一致，测序与Genbank公布的基因序列完全一致。成功构建原核表达载体pPro—EXHTb-2031c，转化E.Coli DH5 α后能特异性表达目的蛋白，大小约20KD，与理论值相一致。蛋白可溶性分析表明该蛋白主要以可溶性方式存在，纯化蛋白经Western—blot鉴定有特异性反应条带。成功构建结核分枝杆菌Rv2031c原核表达载体pPro—EXHTb-2031c，并获得纯化的目的蛋白，为研究新型结核疫苗的靶抗原奠定了基础。
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抗菌肽主要参与天然免疫过程，具有广谱抗菌活性和抗病毒、抗真菌、抗寄生虫及抗肿瘤选择毒性、稳定性、不易产生耐药性等活性。由于其具有这些特殊性质，抗菌肽至今仍被认为是现有抗生素的最佳替代品，其研究及应用已成为生物制药领域中的热点，遍及各个相关领域。有鉴于此，本文分析了抗菌肽的结构特点，阐述了抗菌肽的作用机理，探讨了抗菌肽的制备策略，如人工合成抗菌肽的编码基因，并论述了其应用的优缺点。
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