jadR1定点突变对杰多霉素生物合成的影响

来源 :中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:robert198121
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杰多霉素生物合成激活子JadR1是一个OmpR家族的非典型应答调控蛋白(ARR).与典型应答调控蛋白(RR)不同,JadR1的REC结构域两个保守的天冬氨酸残基被Glu49和Ser50所取代.前期研究表明JadR1的REC结构域能够与杰多霉素后期产物(特别是JdA和JdB)特异性结合,进而调节自身对靶基因的调控强度,首次揭示ARR具有配体结合活性.为进一步探究Glu49和Ser50在JadR1配体结合以及调控过程中的地位,将Glu49和Ser50分别以及组合突变为保守的天冬氨酸即Glu49D,Ser50D和Glu49DSer50D,进一步研究其体外和体内功能.结果表明将这些点突变后的jadR1互补到jadR1突变株中时,与jadR1/pSET:jadRl比较,jadR1/pSET∷G1u49D和jadR1/pSET∷G1u49DSer50D不需乙醇刺激就可明显产生杰多霉素;而在有乙醇刺激时,jadR1/pSET∷Ser50D仍就不能够产生杰多霉素.体外EMSA实验表明Ser50D与靶基因启动子复合物构型发生了变化,但仍具有配体结合活性。G1u49D和靶基因复合物构型未改变,但是配体结合活性明显减弱。突变为保守夭冬氨酸的JadR1是否能够被磷酸化,恢复典型应答调控蛋白的特性,这些都在研究之中。
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