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目的:采用PCR-RFLP(Polymcrase chain reaction-ResUictionfragment length polymophism)方法研究如何快速检测儿童胃黏膜中幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)对克拉霉素的耐药性。
方法:所有胃黏膜标本均来源于2006年9月~2007年2月浙江大学附属儿童医院进行胃镜检查的患儿,取快速尿素酶试验阳性者,简单随机法从中抽取39例。胃黏膜匀浆后,一部分直接抽提基因组DNA并采用PCR-RFLP方法检测菌株23s rRNA基因突变情况,另一部分用于分离培养并测定其对克拉霉素的最低抑菌浓度(minimum inhibitoryconcentration,MIC值)。以传统的分离培养一琼脂稀释法作为金标准,评估快速法的敏感性和特异性。
结果:传统培养法检测出克拉霉素耐药者13例,敏感者26例,耐药率为33.3%。快速RFLP法检测出克拉霉素耐药者14例,敏感者25例,耐药率为35.9%。以传统培养法为金标准,快速法的敏感度为和特异度均为92.3%,阳性预测值为92.86%,阴性预测值为96%。两种方法结果差异无统计学意义(X2=0.06,P>0.05)。Hp对克拉霉素的耐药率较本院2004年报道(16/108株)明显增高,差异有统计学意义(x2=6.20,P<0.05)。
结论:我院就诊儿童感染Hp对克拉霉素的耐药率呈上升趋势。采用PCR-RFLP方法快速检测胃黏膜中Hp对克拉霉素的耐药性具有简便、灵敏、特异、迅速的特点,有望为Hp根除治疗选择抗生素提供依据。