【摘 要】
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[目的]建立一株能保持原代山羊黄体细胞主要生物学特征和功能的永生化黄体细胞系,以该细胞系为受体细胞,探索苦马豆素(SW)对山羊黄体细胞分泌孕酮的影响以及SW诱导山羊黄
【机 构】
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西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌,712100
【出 处】
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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会
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[目的]建立一株能保持原代山羊黄体细胞主要生物学特征和功能的永生化黄体细胞系,以该细胞系为受体细胞,探索苦马豆素(SW)对山羊黄体细胞分泌孕酮的影响以及SW诱导山羊黄体细胞凋亡的信号转导通路,以期揭示SW引起妊娠母畜流产的分子机制,也为进一步解决严重危害我国西部草原畜牧业的家畜疯草中毒问题奠定基础.[方法]用胶原酶消化法和组织培养法分离培养原代山羊黄体细胞,通过脂质体把hTERT基因转染到原代黄体细胞中,经G418筛选、免疫细胞磁珠纯化后,培养50代,3β-HSD染色鉴定、RT-PCR对关键基因的检测、生长曲线检测、核型分析、裸鼠致瘤性试验、软琼脂悬浮生长检测和放射免疫检测孕酮浓度确定为永生化黄体细胞.进一步检测了SW处理后黄体细胞的分泌孕酮的浓度、细胞周期、合成孕酮的关键基因及凋亡相关蛋白分子的表达.[结果]建立了一株保持原代黄体细胞的主要生物学功能和特征的永生化山羊黄体细胞系,低浓度SW能上调该细胞中2个调控孕酮合成的酶P450scc和3β-HSD的表达而促进孕酮的分泌,高浓度SW通过下调cyclin E、cyclin D1和CDK 2的表达而上调p21的表达,使山羊黄体细胞周期阻滞在G0/G1期.SW通过上调Bax和下调Bcl-2的表达,促进Bax向线粒体转位,激活线粒体通路,诱导山羊黄体细胞凋亡,进而降低孕酮的分泌.[结论]本研究建立了一株能保持原代黄体细胞主要生物学功能和特征的永生化黄体细胞系.SW通过激活线粒体通路诱导山羊黄体细胞凋亡,从而调控细胞分泌孕酮.
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