【摘 要】
：
为构建柔嫩艾美耳球虫沉默信息调节因子2(Eimeria tenella silent information regulator 2,EtSIR2)的真核表达质粒,以柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA为模板,PCR扩增出EtSIR2基因,PCR产物经酶切回收纯化目的片段后与经相应酶切的真核表达载体pCAGGs连接,连接产物经PCR和酶切鉴定,再经测序鉴定正确后,分别转染DF-1细胞和BHK细胞进行
【机 构】
：
中国农业科学院上海兽医研究所,农业部动物寄生虫学重点实验室,上海 200241;云南农业大学动物科学技术学院,昆明 650201
【出 处】
：
中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
论文部分内容阅读
为构建柔嫩艾美耳球虫沉默信息调节因子2(Eimeria tenella silent information regulator 2,EtSIR2)的真核表达质粒,以柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA为模板,PCR扩增出EtSIR2基因,PCR产物经酶切回收纯化目的片段后与经相应酶切的真核表达载体pCAGGs连接,连接产物经PCR和酶切鉴定,再经测序鉴定正确后,分别转染DF-1细胞和BHK细胞进行表达,分别用Western blot和间接免疫荧光鉴定EtSIR2基因的表达情况.结果,成功扩增了EtSIR2基因,长度为909 bp,Western blot可见大小约为37 kDa的表达蛋白条带,间接免疫荧光可以检测到特异性绿色荧光,表明成功构建了EtSIR2的真核表达质粒pCAGGs-EtSIR2,并能在哺乳动物细胞和禽类细胞中表达.将构建的重组质粒pCAGGs-EtSIR2、重组蛋白EtSIR2、空质粒pCAGGs分别免疫7日龄雏鸡,同时设置非免疫攻虫组和非免疫非攻虫组.14天后进行二免,二免后第7d除了非免疫非攻虫组之外,其余各组用柔嫩艾美耳球虫上海株孢子化卵囊1×104进行攻虫,检测鸡的增重、盲肠病变记分、卵囊产量等生理指标.同时,在不同时间段采血和脾脏,分别进行抗体水平和淋巴细胞增殖与亚群的检测,通过多个指标进行免疫效果评价.结果显示,重组质粒对免疫期间的增重影响最小.重组质粒组攻虫后的增重与健康非免疫组相当,明显高于攻虫非免疫组(p＜0.05),而重组蛋白组与攻虫非免疫组差异不显著(P＞0.05).重组质粒组和重组蛋白组的病变记分和卵囊减少率相当,均明显低于攻虫非免疫组(p＜0.05).重组蛋白组在首免14d、二免7d、攻虫后4d和7d的抗体水平均明显高于健康非免疫组,而重组质粒组在首免14d与健康对照组相当,二免7d、攻虫后4d和7d明显高于健康非免疫组.在二免后7d,重组质粒组和重组蛋白组的的脾脏淋巴细胞增殖水平和CD3+T淋巴细胞水平相当,均显著高于健康非免疫组(P＜0.05)；重组蛋白组CD4+/CD3+T淋巴细胞水平显著高于其余各组(P＜0.05),而其余各组之间差异不显著(P＞0.05)；各组之间CD8+/CD3+T差异不显著.结果表明,重组质粒和重组蛋白对感染球虫鸡均具有一定的保护效果,但在生理指标方面,重组质粒组稍好于重组蛋白组,而重组蛋白在诱导抗体水平和T淋巴细胞水平方面稍优于重组质粒组.
其他文献
分离纯化柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)扬州株的配子体,提取总RNA后用RT-PCR方法扩增出Etgam59基因.将目的片段与pGEM-T-Easy载体连接,常规方法转化感受态大肠杆菌DH5α,蓝白斑法筛选阳性克隆,经PCR和EcoR Ⅰ酶切鉴定后测序,用相关软件进行序列分析.结果显示,克隆的Etgam5基因全长为1617 bp,与E.tenella基因组序列中Etgam59进行比
本实验室前期利用酵母双杂交技术,以柔嫩艾美耳球虫顶体膜抗原1(EtAMA1)为诱饵,筛选了柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库,获得一些潜在的与EtAMA1相互作用蛋白的ESTs序列.本研究选择其中一条编号为CHIP39的EST序列进行研究.该序列含有3末端的Ploy(A)尾,利用5RACE技术获得了该基因的全长cDNA序列,并对该基因的生物信息学信息、转录水平分析、免疫定位分析和体外抑制等
地克珠利是一种三嗪类化合物,具有高效、低毒、广谱的抗球虫效力,但至今其作用机制尚不清楚.研究表明,柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药株LDH(rEtLDH)与敏感株LDH(sEtLDH)之间同工酶谱存在明显差异,提示EtLDH与地克珠利抗球虫作用机理有一定关系.本研究比较了sEtLDH与rEtLDH基因特性的差异以及研究了地克珠利对E.tenella孢子化过程中LDH的影响研究.结果显示,sEtLDH与r
肠道菌群对宿主的营养和健康起到至关重要的作用,正常肠道菌群的存在可以抑制病原体的入侵。然而肠道菌群的组成和结构并不是一成不变的,它们会随着年龄、饮食、外部环境及肠道致病菌的存在而改变。对于柔嫩艾美耳球虫与肠炎沙门氏菌混合感染对肠道菌群的影响目前的研究较少。(目的)本文研究柔嫩艾美耳球虫与肠炎沙门氏菌单独感染及混合感染对盲肠肠道菌群的影响。(方法)通过16S rRNA Miseq高通量测序检测鸡盲肠
本研究将鸡巨型艾美耳球虫保定株的免疫原性进行研究,为鸡巨型艾美耳球虫的免疫防治提供基础.将7日龄雏鸡随机分为5组,每组30只.第1组为卵囊免疫组,2组为黄芪多糖免疫组,3组为卵囊+黄芪多糖免疫组,4组为攻虫非免疫组,5组为健康对照组.7日龄首免,第1组口服免疫鸡巨型艾美耳球虫保定株卵囊,1×103个/只；2组肌注黄芪多糖注射液,0.1mL/只；3组口服免疫卵囊,同时肌注黄芪多糖,(1×103个+0
根据巨型艾美耳球虫Emgam56基因去除信号肽后的ORF序列和真核表达载体pPICzαA的酶切位点设计一对特异性引物,以本实验室保存的重组质粒pGEM-T-Emgam56为模板,PCR扩增出目的片段,插入表达载体pPICzαA中,构建重组表达质粒pPICzαA-Emgam56.对酶切鉴定和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序,将连接正确的重组质粒线性化后用电穿孔法转化到毕赤酵母GS115,利用博莱霉
采用单卵囊技术,从保定市某鸡场雏鸡粪便中分离出疑似艾美耳球虫.对分离株进行形态学和生活史观察.结果其寄生于小肠中段、卵囊为卵圆形、卵囊壁金黄色,大小为(32.0-40.8)×(20.8-31.2)um,平均大小为36.4um×26.0um,卵囊形态指数为1.4.卵囊窄端有一折光性强的极体,无内外残体.最短孢子化时间为26h,完全孢子化时间为28h,潜隐期128h.鉴定为鸡巨型艾美耳球虫,命名为保定
保守microRNA(miRNA)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,其大小长约20～25个核苷酸,广泛存在于动植物细胞中.miRNA通过"种子序列"实现对靶标基因的识别,因此,其具有高度保守性.miRNA通过碱基编辑对多个靶标基因进行调控,这一现象决定了miRNA的多样性.为了分析蜱miRNA碱基编辑特征,利用高通量测序方法对我国五个主要的蜱种(微小牛蜱,长角血蜱,银盾革
为调查广西地区小土蜗螺(Galba pervia)中寄生吸虫种类,于2012年8月至2014年8月期间,在广西区内邕江、柳江、右江、郁江流域的南宁、柳州、桂林、玉林、防城港、北海、梧州、贵港、来宾和钦州等10个城市的65个地点采集小土蜗螺(约200个/地点),随机挑选100个采用压螺的方法检查螺内吸虫蚴虫携带情况,将检获雷蚴、尾蚴、囊蚴挑出,抽提其全基因组DNA,运用吸虫ITS2通用引物,PCR扩
为了摸清青海省牦牛寄生虫病流行病学,进而为有效提高牦牛寄生虫病防治水平提供依据,2008～2014年,在青海省牦牛主要养殖区青南高原、环湖牧区的10个点,选择8个月未使用任何抗寄生虫药物的牦牛196头,剖检结合屠宰,采用寄生虫学完全剖检法、背部皮肤触摸法、间接血凝法(IHA)、粪便虫卵漂浮法和肌肉压片法等多种方法,采集与分离线虫、吸虫、绦虫及绦虫蚴、蜘蛛昆虫、原虫等寄生虫,进行鉴定分类与统计分析；