【摘 要】
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目的：雪旺细胞(Schwann cell)是周围神经系统中主要的神经胶质细胞,能够营养保护外周神经,在外周神经损伤修复中发挥着重要作用.有研究证明,外神经损伤后,雪旺细胞失去与轴突的连接,进入激活态(非成熟状态),增殖加快,NGF、BDNF、GDNF、NT-3、NGF、LIF和VEGF等表达上调.随着表观遗传学的发展,许多研究表明：在成熟和发育的神经组织或细胞中,DNA的甲基化参与了营养因子的表达
【出 处】
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中华医学会第十八届骨科学术会议暨第十一届COA国际学术大会
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目的：雪旺细胞(Schwann cell)是周围神经系统中主要的神经胶质细胞,能够营养保护外周神经,在外周神经损伤修复中发挥着重要作用.有研究证明,外神经损伤后,雪旺细胞失去与轴突的连接,进入激活态(非成熟状态),增殖加快,NGF、BDNF、GDNF、NT-3、NGF、LIF和VEGF等表达上调.随着表观遗传学的发展,许多研究表明：在成熟和发育的神经组织或细胞中,DNA的甲基化参与了营养因子的表达,但是仅局限与个别营养因子.目前,并没有研究全面的分析外周神经损伤后DNA甲基化对雪旺细胞分泌功能的影响.因此,本课题拟通过检测激活态和非激活态雪旺细胞分泌功能相关基因DNA甲基化差异,探究DNA甲基化对雪旺细胞分泌功能的影响.方法 实验组通过结扎Wistar 4周龄雌性大鼠坐骨神经,7天后提取激活态雪旺细胞；对照组细胞采用大鼠的臂丛神经提取非激活态雪旺细胞.细胞传代至P3代,进行细胞鉴定：特异性标记物S-100免疫荧光染色；在96孔板中种植激活态和非激活态雪旺细胞,3000个/孔,在1、3、5、7天通过Cell Counting Kit-8(CCK8)法检测细胞增殖；细胞培养至P4代后留取样本,运用甲基化DNA免疫共沉淀测序(Methylated DNA immunoprecipitation sequencing, MeDIP-Seq)技术对样本进行高通量测序.采用MEDME 算法计算出激活态雪旺细胞与非激活雪旺细胞基因之间的差异性甲基化区域(Differentially methylated region DMR).对结果进行统计分析.结果 光学显微镜下观察,激活态雪旺细胞和非激活态雪旺细胞形态无明显差异,呈梭形或三角形；细胞传代至P3代,通过免疫荧光染色发现激活态雪旺细胞和非激活态雪旺细胞呈S-100阳性,激活态雪旺细胞阳性率达96％,非激活态雪旺细胞阳性率95％.CCK-8法检测细胞增殖曲线显示：随着时间的推移,曲线逐渐上升,与非激活态雪旺细胞相比,激活态雪旺细胞增殖活性较好.DNA的甲基化检测显示共有Rab31, Asic1, Nmb, Arf1, Il4, Il1rn Tbx3, Nos1ap和Rph3al 等12个与细胞分泌相关基因.结论 本课题发现,外周神经损伤后雪旺细胞状态发生转变,增殖活性变强,激活态雪旺细胞展现出更强的生物活性,而且DNA甲基化检测获得了外周神经损伤后雪旺细胞分泌相关甲基化基因,为进一步实验探究奠定了基础.
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