【摘 要】
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利用数据库NCBI,检索到5条与拟南芥AtAKT1核苷酸序列高度同源的棉花EST序列,利用软件DNASTAR将其进行拼接,获得一条长度为1470 bp的Unigene,结合5′RACE和3′RACEPCR技术获得
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利用数据库NCBI,检索到5条与拟南芥AtAKT1核苷酸序列高度同源的棉花EST序列,利用软件DNASTAR将其进行拼接,获得一条长度为1470 bp的Unigene,结合5′RACE和3′RACEPCR技术获得GhAKT1的完整ORF阅读框.荧光定量PCR技术分析该基因在棉花中表达模式,发现GhAKT1在三叶期棉花的各部位均表达,其中叶部表达量最高.GhAKT1受低钾(0.03mmol·L-1)诱导后表达量升高,并在处理后24 h时达到最高.将该基因利用农杆菌介导法分别转化野生型拟南芥(Col生态型)和akt1突变体,获得数个转基因阳性株系,在MS培养基上野生型超表达转基因植株生物量比对照增加29％～54％,在低钾(100 μmol·L-1)MS培养基上比对照增加7.9％～1.6％;而aktl突变体过表达转基因植株在低钾MS培养基上比对照增加98％～141％.在低钾MS培养基上进行发芽试验,发现过表达GhAKT1的aktl突变体的发芽率由57.9％显著提高到97.3％～99.1％,基本达到野生型的发芽率水平.对转GhAKT1基因植株进行非损伤性离子微测(Noninvasive Micro-test Technique,NMT),结果表明,野生型超表达转基因植株在低钾处理后其钾吸收速率相比对照提高了0.7～1.7倍,而aktl突变体过表达转基因植株相比对照提高了2.0～4.2倍.
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