狂犬病病毒P基因的原核表达及间接ELISA方法的应用

• 作 者: 赵刚;李刚;范晓娟;
• 机 构: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京 100193
• 出 处: 中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会
• 发表日期: 2010年期

根据GenBank发表的狂犬病病毒(Rabies Virus，RV)LEP-Flury株的基因序列设计引物，通过RT-PCR扩增出P基因的全长序列，克隆于pGM-T载体中，获得重组质粒pGM-T-P，将重组质粒用限制性内切酶NotI和EcoRI进行双酶切，酶切产物定向克隆于原核表达载体pET-32a(+)中，构建原核重组表达质粒pET-32a-P，阳性重组质粒转化原核表达宿主菌BL21(DE3)，用IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western-blot分析确定蛋白表达量和特异性。
用纯化的蛋白作为诊断抗原，通过对反应条件的优化，初步将间接ELISA方法应用于狂犬病抗体的检测中。