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目的: 利用pEGFP-N1载体构建了含有PRRSV JL/07/SW毒株GP5基因及猪IL-18基因融合蛋白真核表达载体pEGFP-IL18-GP5。方法:采用RT-PCR方法扩增了JL/07/SW毒株GP5基因和猪IL-18基因。将该基因与真核表达载体pEGFP—N1连接,克隆获得重组质粒pEGFP-IL18-GP5。
将获得重组质粒转染MACR-145细胞,检测目的蛋白的表达情况。结果:RT-PCR分别扩增出GP5基因和IL-18基因,大小与预期一致;通过荧光显微镜观察、SDS—PAGE和Western blot试验证明GP5基因和IL-18基因在MACR-145细胞中成功表达。结论:成功构建含有PRRSV JL/07/SW毒株GP5基因及猪IL-18基因融合蛋白真核表达载体pEGFP-IL18-GP5,为研究基于以EGFP为报告基因的IL18-GP5为耙蛋白的核酸疫苗以及细胞因子对PRRS核酸疫苗免疫效果的影响奠定了实验基础。