【摘 要】
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碳酸酐酶是一类含锌蛋白酶类,存在于无脊椎动物的大部分组织中,其催化的最重要反应是二氧化碳可逆的水合作用,具有维持机体酸碱平衡、调节体液pH的作用.本文通过RT-PCR和RACE技术获得凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)胞质碳酸酐酶(cytoplasmic carbonic anydrase,CAc)和磷脂酰肌醇连碳酸酐(glycosyl-phosphatidylinositol
【机 构】
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中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室,青岛,266003
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碳酸酐酶是一类含锌蛋白酶类,存在于无脊椎动物的大部分组织中,其催化的最重要反应是二氧化碳可逆的水合作用,具有维持机体酸碱平衡、调节体液pH的作用.本文通过RT-PCR和RACE技术获得凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)胞质碳酸酐酶(cytoplasmic carbonic anydrase,CAc)和磷脂酰肌醇连碳酸酐(glycosyl-phosphatidylinositol-linked carbonic anhydrase,CAg)基因的全长序列,CAc全长1161bp,GenBank登录号：HM991703.2；CAg全长2187bp,GenBank登录号：JX975725.序列分析表明CAc基因含有28bp的5端非编码区、323bp的3端非编码区和810bp的开放阅读框,开放阅读框编码270个氨基酸；CAg基因含有98bp的5 端非编码区、1162bp的3端非编码区和927bp的开放阅读框,开放阅读框编码308个氨基酸.同源性分析显示,2种基因序列与其他对虾和蟹类的碳酸酐酶具有很高的同源性,其中CAc氨基酸序列与斑节对虾(Penaeus monodon)的同源性为99％,与可口美青蟹(Callinectes sapidus)的同源性为98％,与三叶真蟹(Carcinus meanas) 的同源性为70％；CAg氨基酸序列与可口美青蟹的同源性为73％,与三叶真蟹的同源性为68％.由进化树分析可知,CAc和CAg是碳酸酐酶基因超家族的两个亚族,两者均与虾蟹类亲缘关系最近,与昆虫次之,而与脊椎动物亲缘关系较远.另外,由DNA比对发现CAg在基因的5端比CAc多出了近100 bp的片段,氨基酸比对多出22个氨基酸的序列,这可能是CAg与细胞膜结合的信号肽区域.蛋白结构预测得知,CAc和CAg的Zn离子结合位点分别位于第80-100个氨基酸和第105-120个氨基酸,附近具有一个由Val、Leu、Tyr和Leu所构成的疏水口袋和由Thr、His所组成的一个质子转移通道,两种碳酸酐酶均由单一肽链组成,每个肽链分子含一个Zn离子,其中Pro含量最高,无二硫键.同时,CAc在鳃丝、肌肉、肝胰脏和神经节中有较高表达,在血细胞内有少量表达,在心脏内不表达,而CAg在鳃丝、肌肉和神经节内表达较高,在眼柄、肝胰脏内表达较少,在心脏、血细胞内不表达.由实时荧光定量PCR方法分析表明,凡纳滨对虾在盐度和pH变化下鳃组织CAc、CAg基因表达具有明显差异,盐度变化后CAc基因表达在24-48h内明显升高,均于24h时达到最大值,72h恢复至对照组水平,同时盐度下降后,CAg基因表达在24-72h内呈峰值变化,于48h时达到最大值,均明显高于对照组水平；而pH升高或下降后CAc、CAg基因表达分别在48h、12h时明显升高,其余实验时间与对照组无显著差异.综上所述,本文成功克隆得到凡纳滨对虾2种碳酸酐酶基因全长的,分析了在盐度、pH变化下基因的表达变化,为对虾鳃丝离子转运、体液pH调节等生理功能的研究奠定了理论基础.
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以凡纳对虾为研究对象，评价不同存活状态的益生菌Bacillus coagulans对生长性能、成活率、消化酶活性以及肉质等的作用效果，试验分为对照组和两个试验组，各设三个重复，周期50天，其中试验组1和试验组2饵料中分别添加同浓度(107 cfu/g)的存活和灭活的菌株。结果表明，益生菌显著提高了对虾末重、日增重和存活率，其中试验组1对虾生长性能显著高于其余两组，同样与试验组2和对照组比较，对虾肠
在饲料中添加0、30和50 mgCu/kg饲料的蛋氨酸铜,投喂凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)7 d,14 d和21d,检测对虾体组织铜蓄积、免疫相关基因(Toll受体mRNA和溶菌酶mRNA)表达水平和免疫抗菌能力的变化.结果表明：凡纳滨对虾肝胰腺铜含量随着饲料蛋氨酸铜添加量增加及投喂时间延长而显著增加(P＜0.05)；对虾肌肉的铜含量显著低于肝胰腺的铜含量.饲料铜水平对凡
热休克蛋白是一套高度保守的蛋白质,以快速响应环境应激著称.为阐明凡纳滨对虾不同热休克蛋白在应对某一特定急性环境应激的具体功能,本研究利用荧光实时定量反转录聚合酶链式反应技术比较研究了凡纳滨对虾4个热休克蛋白基因(Lvhsp60, Lvhsp70,Lvhsc 70,LvHSP90)在急性热休克、酸碱刺激、重金属暴露下的基因时序表达谱.结果表明,四种基因在上述三种应激下均表现出不同的表达特征.在急性热
本实验以实用饲料喂基础，通过两个为期90天的生长实验，分别在27ppt和1ppt的盐度下，比较研究饲料中锌(以硫酸锌为锌源)的不同添加水平(13.8、27.6、51.8、104、172、242、345mg/kg饲料)对凡纳滨对虾的生长性能、虾体特定金属离子含量、血液生化成分(谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮、胆固醇、甘油三酯)、血细胞计数和肝脏酶活(钠钾ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶
为确定三疣梭子蟹对蛋白质的适宜需要量，进行了为期8周的生长实验.以鱼粉、豆粕、小麦蛋白粉和磷虾粉作为蛋白源，设计了6种等氮等能饲料，饲料中蛋白质梯度分别为30％、35％、40％、45％、50％和55％.每个处理3个重复，每个养殖单元放养平均体重为2.50±0.25g的三疣梭子蟹20只，实验采用长方形塑料筐，每天投料1次，接近饱食量投喂.每个塑料筐用尼龙网分隔成大小相等的两部分，其中每部分单独放养一
采用不同浓度铜强化生物饵料卤虫,探讨不同强化处理的卤虫对中华绒螯蟹Ⅲ期幼体的生长、抗氧化酶活力和耐受盐度胁迫的影响.试验组1为对照组(未用铜强化卤虫组),试验组2-4分别采用含有不同浓度铜的海洋微藻提取物ωAl(0.1mg/ml-试验2,0.2 mg/ml-试验3和0.4mg/ml-试验4)强化卤虫.结果表明,各试验组间的中华绒螯蟹幼体发育指数差异不显著,其变化范围为5.75-5.93,但试验组2
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采用2×6因子设计方法,以酪蛋白和明胶为蛋白源,分别配制了含1％和2％磷脂,6个氯化胆碱水平(0、250、500、1000、2000、4000 mg/kg diet)的12组等氮、等脂精制饲料,在室内水族箱条件下对体重为(0.22±0.01g)的中华绒螯蟹幼蟹进行为期6周的饲养试验,每处理组各设4个平行.结果表明：当饲料中胆碱的添加水平分别为1000mg/kg(1％的磷脂水平)和500mg/kg
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