【摘 要】
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目的 建立调控因素存在下表达丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶的转基因小鼠.方法 NS3/4A丝氨酸蛋白酶的真核表达质粒PBⅠ-Ⅲ/LoxP-Luc-PolyA-LoxP-NS3/4A.该重组质粒线性化后,经显微注射制备转基因小鼠.首建鼠及经PCR检测阳性的子代鼠与C57BL/6小鼠交配传代.选择部分F2鼠与已经稳定建系的转基因小鼠Lap杂交,利用在体生物发光成像系统(In vivo biolu
【机 构】
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第四军医大学基础医学院中心实验室 710032
【出 处】
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第6届中国医师协会全国检验与临床学术会议暨国际检验与临床高峰论坛
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目的 建立调控因素存在下表达丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶的转基因小鼠.方法 NS3/4A丝氨酸蛋白酶的真核表达质粒PBⅠ-Ⅲ/LoxP-Luc-PolyA-LoxP-NS3/4A.该重组质粒线性化后,经显微注射制备转基因小鼠.首建鼠及经PCR检测阳性的子代鼠与C57BL/6小鼠交配传代.选择部分F2鼠与已经稳定建系的转基因小鼠Lap杂交,利用在体生物发光成像系统(In vivo bioluminescent imaging,BLI)检测肝脏稳定表达报告基因(Luciferase,Luc)的经盐酸强力霉素(Doxycycline,Dox)诱导的双转基因子代鼠,并选择性针对稳定表达系传代扩群.结果 酶切鉴定和测序分析显示重组载体构建成功.经PCR检测得到6只转基因首建鼠,其中3只可繁殖传代并持续检测到阳性子代鼠.BLI结果显示,由其中1只首建鼠传代而来的不同F2鼠与Lap鼠杂交得到的部分双转基因鼠肝脏部位发光信号强烈,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达.结论 建立了转基因小鼠NS3/4A,并筛选到调控因素存在时转入外源基因特异稳定表达的转基因小鼠,为进一步建立严格调控型表达NS3/4A蛋白酶的小鼠模型奠定基础.采用分子克隆技术构建可受Tet-On调控系统和Cre—LoxP基因敲除系统双重调控表达HCV.
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