【摘 要】
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随着抗生素大量而广泛的使用,细菌的耐药性已成为世界范围内关注的问题,对细菌携带耐药基因的检测是成为生物安全调查评估的新途径.本实验应用PCR方法扩增新霉素耐药基因aph,将其克隆于pEASY—T1载体并测序.通过Genbank同源性比较,在aph基因保守区设计了一套环介导等温扩增(LAMP)引物,通过条件优化,建立了耐新霉素aph基因LAMP检测方法,其最佳工作条件为:甜菜碱浓度为0.8mol/L
【机 构】
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天津市动物疫病预防控制中心,天津 300402 天津大学生命科学学院,天津 300072
【出 处】
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第四届京津冀一体化畜牧兽医科技创新研讨会暨“瑞环杯”新思想、新方法、新观点论坛
论文部分内容阅读
随着抗生素大量而广泛的使用,细菌的耐药性已成为世界范围内关注的问题,对细菌携带耐药基因的检测是成为生物安全调查评估的新途径.本实验应用PCR方法扩增新霉素耐药基因aph,将其克隆于pEASY—T1载体并测序.通过Genbank同源性比较,在aph基因保守区设计了一套环介导等温扩增(LAMP)引物,通过条件优化,建立了耐新霉素aph基因LAMP检测方法,其最佳工作条件为:甜菜碱浓度为0.8mol/L,Mg+浓度为20mmol/L,反应温度63℃,时间50min.此方法可在60min左右完成对aph基因的检测,特异性好,aph基因的LAMP检测灵敏度与PCR相当.对38株葡萄球菌分离株的aph基因的LAMP检测表明,阳性携带率为84.2％.
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