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目的研制血清胰岛素的时间分辨荧光免疫分析(Time Resolved Fluorescence Immunoassay,TRFIA)试剂盒,促进检测试剂的国产化。方法采用双抗体夹心法建立胰岛素TRFIA试剂盒,并进行方法学评价。主要材料购自Biodesign、PerKin Elmer等公司,试剂盒组份制备方法包括固相包被板的制备、Eu3+标记抗体的制备等。结果①胰岛素可测范围:经log-logit函数数据处理程序处理检测数据,拟合的标准曲线在5.0～180μU/ml时成线性;②分析灵敏度:以零标准品荧光值的+2SD值代入标准曲线方程计算最低检测量为0.05μU/ml;③精密度:经重复检测低、中、高三种浓度的质控血清,其批内平均CV值为7.51%;其批间平均CV值为11.00%;④准确度:用回收试验测试系统的准确度,回收率为99.37%;⑤特异性:用该胰岛素试剂盒检测C-肽(20ng/ml),测定结果为4.36μU/ml;符合判定标准的要求,试剂盒无交叉反应;⑥试剂稳定性:三批试剂分别放置于4℃半年和9个月,以及37℃7天后,参考标准品各点荧光值未见明显降低,且本底荧光值无明显升高,表明试剂盒标准曲线无明显漂移,满足稳定性要求;⑦参考范围:检测200份体检者血清,胰岛素测定结果分别为7.33±3.26μU/ml,大多数样本的浓度值胰岛素在10μU/ml以下(77%)。综合本研究及临床现行参考范围值,认为使用该试剂盒进行检测,胰岛素血清参考值范围为2.34～26.4μU/ml可行。但各医院使用时根据各地区样本的差异,建议设立自己的参考范围;⑧方法学比较:收集122份血清标本,用TRFIA与电化学发光免疫分析方法同时检测,其线性方程为yins=0.9992x+0.1984,其相关系数为rins=0.9665。结论胰岛素试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代昂贵的国外产品用于糖尿病的早期辅助诊断以及判断疗效和预后。