综合应用高分辨率熔解曲线分析和焦磷酸测序技术快速筛查分析线粒体糖尿病的MT3243A>G突变

• 作 者: 危新俊[1]杜秀娟[2]王从容[2]颜景斌[3]
• 机 构: 上海市儿童医院,上海交通大学附属儿童医院,上海医学遗传研究所
• 出 处: 第十四次全国医学遗传学学术会议
• 发表日期: 2015年期

　　目的：建立快速、准确、无创、低成本的线粒体糖尿病MT3243A＞G位点突变的筛查方法.方法：为了比较哪种来源的样本更适合进行人群中MT3243A＞G突变位点的快速筛查,本研究采集已确诊的6例线粒体糖尿病患者及50例正常对照的血液、唾液及尿沉渣样本,采用焦磷酸测序方法检测并比较不同来源样本中MT3243A＞G突变位点的杂合度水平,每个样本重复3次实验.收集来自于上海市4个社区的糖尿病患者尿沉渣样本,共计1070例,应用高分辨率熔解曲线(high resolution melting curve method,HRM)对MT3243A＞G突变位点进行快速筛查,阳性样本进一步采用焦磷酸测序技术进行验证,并定量检测MT3243A＞G突变位点的杂合度水平.结果：焦磷酸测序结果显示,6例线粒体糖尿病患者尿沉渣中MT3243A＞G突变位点的杂合度均高于唾液和血液2倍以上,唾液中突变杂合度略高于血液；50例正常对照的血液、唾液及尿沉渣样本中均未检出MT3243A＞G位点突变.由于尿沉渣样本可通过常规检查获取,且突变杂合度最高,因此我们决定采用尿沉渣样本作为后续人群筛查实验的取材对象.通过HRM分析,在1070例糖尿病尿沉渣样本中筛查出2例疑似MT3243A＞G位点突变的样本,其熔解曲线与已知MT3243A＞G位点突变的样本一致.进一步经焦磷酸测序验证,确定他们为MT3243A＞G位点突变.焦磷酸测序定量分析的结果显示,两个患者尿沉渣样本中MT3243A＞G位点杂合度分别为33.32％和14.67％.结论：尿沉渣样本取材方便、无创、突变杂合度高,可以作为人群中线粒体糖尿病MT3243A＞G位点突变筛查的首选样本. HRM技术使用成本低,可以实现点突变的快速筛查.焦磷酸测序技术检测灵敏度高、定量精确.本研究中将两者的优势相结合,建立了两步法快速筛查检测线粒体糖尿病MT3243A＞G位点突变的方法,并在大样本人群中得到了有效的应用,为线粒体糖尿病的早期诊断提供了可靠的方法.