表皮干细胞与角质形成细胞微小RNA的差异表达谱分析

来源 :2014感染伤口的防治与修复研讨会、中国金属学会冶金安全与健康分会烧伤外 科学专业委员会年会、华北地区烧伤与整形外科学术 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sinjorzhang
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  目的 探讨人表皮干细胞与角质形成细胞微小RNA(miRNA)的表达谱差异.方法:(1)采用酶消化法和Ⅳ型胶原快速贴壁相结合的方法获得人原代表皮干细胞及角质形成细胞,倒置显微镜下观察培养细胞的生长状况,免疫细胞化学染色法行β1整合素、CK19、CK1、CK10单克隆抗体检测鉴定.(2) Trizol一步法分别提取2组细胞总RNA,甲醛变性胶电泳质检.mirVanaTMmiRNA分离试剂盒对其进行纯化,使用miRNA标记和杂交试剂盒进行荧光标记及芯片杂交,利用Feature Extraction(v10.7)软件对杂交图片进行分析,GeneSpring(GX10.0)软件进行数据归一化及差异分析,同时应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法验证miRNAs芯片结果的可靠性.(3)预测差异表达的miRNA的靶基因.结果:(1)快速黏附于Ⅳ型胶原的细胞群培养3d能形成明显克隆,免疫细胞化学染色显示β1整合素及CK19呈阳性表达,为表皮干细胞;不能快速黏附于Ⅳ型胶原的细胞群培养3d无明显克隆形成,CK1及CK10呈阳性表达,为角质形成细胞.(2)筛选出人表皮干细胞中表达上调的miRNAs25个,表达下调的miRNAs 166个.其中显著上调的miRNAs有hsa-miR-197-5p、hsa-miR-125b-5p,hsa-miR-376a-3p等;显著下调的miRNAs有hsa-miR-29b-3p、hsa-miR-203、hsa-miR-34a-3p等.其中上调的hsa-miR-197-5p和下调的hsa-miR-29b-3p的RT-PCR验证结果与芯片检测结果具有较好的一致性.(3)部分miRNAs靶基因预测提示miRNAs与细胞增殖分化、凋亡衰老等生物学特性有关.结论:人表皮干细胞与角质形成细胞miRNA的表达存在明显差异,可能与表皮干细胞和角质形成细胞两者不同的增殖分化能力等生物学特性有关.
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