【摘 要】
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用禽流感病毒番鸭分离株ZM(A/Muscovy/Zhejiang/2000(H5N1),接种11日龄SPF鸡胚,收集死亡胚尿囊液经适当方法处理后作为免疫原免疫BALB/C小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,细胞融
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用禽流感病毒番鸭分离株ZM(A/Muscovy/Zhejiang/2000(H5N1),接种11日龄SPF鸡胚,收集死亡胚尿囊液经适当方法处理后作为免疫原免疫BALB/C小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,细胞融合后经间接ELISA检测,得到一株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,命名为B<,2>B<,11>,制备的单抗腹水效价为18Log2.免疫印迹(Western-Blot)和琼脂扩散试验表明所得单抗是针对禽流感H5亚型病毒的基质蛋白(M蛋白)的M<,1>及M<,2>的.单抗的热稳定性结果表明,腹水单抗分别在37℃、25℃、4℃放置20天,其ELISA效价与-20℃冻存保存的腹水单抗的ELISA效价(1:262144)无差别,说明腹水单抗具有良好的热稳定性.抗体分泌稳定性结果表明,杂交瘤细胞体外连续传代80天后以及液氮冻存的杂交瘤细胞6个月后复苏,仍具有稳定的抗体分泌能力.细胞上清抗体ELISA效价为1:256,腹水单抗ELISA效价仍不小于1:262144.单抗的特异性试验结果表明单抗只与H5亚型的禽流感病毒反应,而不与其它禽类病毒反应.单抗的所有这些特性为将以此单抗介导的快速诊断H5亚型禽流感的相关研究奠定了坚实的基础,将有良好的应用前景.
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