【摘 要】
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[目的]研究DNA-PKcs在电离辐射诱发的细胞自噬中的作用及其对受照细胞亚致死性损伤修复的作用.[材料和方法]利用慢病毒载体(pSicoR)构建稳定表达细胞系Hela-shDNA-PKcs及
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京市放射生物学重点实验室,北京100850
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
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[目的]研究DNA-PKcs在电离辐射诱发的细胞自噬中的作用及其对受照细胞亚致死性损伤修复的作用.[材料和方法]利用慢病毒载体(pSicoR)构建稳定表达细胞系Hela-shDNA-PKcs及其对照细胞系Hela-shNC.利用不同剂量(分割照射：3Gy×2和单剂量：6Gy)的X-ray照射Hela-shDNA-PKcs和Hela-shNC细胞,通过CCK8实验比较两者在不同的时间点对放射的敏感性；上述的照射剂量分别联合自噬抑制剂3-MA和自噬激动剂rapamycin处理Hela-shDNA-PKcs和Hela-shNC细胞,通过CCK8实验比较两者的在不同时间点对X射线的敏感性；Western blot实验检测Hela-shDNA-PKcs和Hela-shNC细胞在给予单纯照射、照射联合自噬抑制剂3-MA、照射联合自噬激动剂rapamycin的处理后,自噬相关蛋白LC3,P62,BECLIN1,mTOR等蛋白水平的表达变化；克隆形成实验检测Hela-shDNA-PKcs和Hela-shNC细胞在上述处理后的细胞活存；流式细胞术检测单纯照射、照射联合自噬抑制剂3-MA细胞的凋亡变化,激光共聚焦荧光显微镜下观察电离辐射诱发的细胞自噬在Hela-shDNA-PKcs和Hela-shNC细胞变化. [结果]成功构建了DNA-PKcs稳定沉默细胞株Hela-shDNA-PKcs及其对照细胞株Hela-shNC；沉默细胞中的DNA-PKcs,细胞对X-ray射线放射敏感性增强,促进细胞自噬,细胞凋亡增加；X-ray射线联合自噬抑制剂3MA也能使细胞的放射敏感性增强；3Gy×2的分割照射与6Gy的单纯照射相比较,自噬明显降低.[结论]DNA-PKcs敲低增加细胞的放射敏感性,促进自噬的发生.
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