【摘 要】
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目的 建立一种快捷、灵敏的检测方法,即反转录-环介导等温扩增方(RT-LAMP)用于仙台病毒(SeV)的检测.方法 根据GenBank公布的SeV序列(DQ219803.1),在其保守区域设计了六套LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320C仪监测反应进程并筛选最佳引物、反应条件,建立对SeV核酸进行特异性扩增的RT-LAMP检测方法,并可通过加入目测荧
【机 构】
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上海实验动物研究中心,上海201203 上海实验动物研究中心,上海201203;扬州大学兽医学院,
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目的 建立一种快捷、灵敏的检测方法,即反转录-环介导等温扩增方(RT-LAMP)用于仙台病毒(SeV)的检测.方法 根据GenBank公布的SeV序列(DQ219803.1),在其保守区域设计了六套LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320C仪监测反应进程并筛选最佳引物、反应条件,建立对SeV核酸进行特异性扩增的RT-LAMP检测方法,并可通过加入目测荧光检测试剂肉眼判断结果.对所建立的方法进行了敏感性、特异性评估并对92份样品进行了检测.结果 该方法在63℃恒温下作用60 min,SeV RNA获得了高效率的特异性扩增,与其余常见小鼠病毒无交叉反应；最低检出量为2.1 TCID50 SeV,比RT-PCR方法高1 02倍；肉眼判断结果与RealTime Turbidimeter LA-320仪监测结果一致；通过对92份样品的RT-LAMP,RT-PCR和间接ELISA方法的检测比对,三者符合率为100％.结论 本研究建立的SV RT-LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏,操作简单的特点,具有良好的应用前景.
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