【摘 要】
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目的 建立衰老相关的内质网应激环境的神经干细胞三维培养模型.方法 SD胎鼠脑神经干细胞分离培养；比较不同生物材料作为支架的神经干细胞分化情况.生物材料组包括胞外基质
【机 构】
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大连医科大学,中西医结合基础研究所,116044
【出 处】
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世界中医药学会联合会第二届老年医学专业委员会换届会暨2015学术年会
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目的 建立衰老相关的内质网应激环境的神经干细胞三维培养模型.方法 SD胎鼠脑神经干细胞分离培养；比较不同生物材料作为支架的神经干细胞分化情况.生物材料组包括胞外基质蛋白胶原,胶原+层粘蛋白组,Matrigel,Matrigel+层粘蛋白,Matrigel+层粘蛋白+纳米电纺丝材料nanomatrix.经内质网应激诱导剂衣霉素TM刺激神经干细胞1-3d后,利用免疫荧光法观察神经干细胞marker Nestin表达；神经元marker TUJ1；海马神经颗粒细胞前体marker FOXG1和成熟颗粒细胞marker PROX1表达情况.结果 神经干细胞体外培养1-3 d,呈神经球生长,神经球直径达100-200 μm,表达nestin,.与2D培养相比,经不同材料组作为支架的三维培养,神经干细胞分化时间缩短,分化培养1d后,即可观察神经突触生长.Matrigel组与胶原组比较,分化较为明显,神经元marker TUJ1表达增强；加入层粘蛋白后,TUJ1表达进一步增加.经TM刺激1d,神经干细胞分化有部分损伤,与2D及胶原组比较,Matrigel+层粘蛋白组,分化损伤较小.进一步研究发现,在Matrigel+层粘蛋白的胞外基质蛋白中加入纳米电纺丝材料na nomatrix培养3d后,神经干细胞分化明显增加,神经突触长度增加,TUJI表达增强；并且加入nanomatrix作为生物支架后明显阻断了TM诱导的神经干细胞分化损伤；TM损伤的TUJ1,FOXG1及PROX1表达均有所逆转.结论 以胞外基质蛋白及电纺丝材料作为支架的神经干细胞三维培养模型,其对内质网应激环境的敏感性不同.此三维培养体系对于治疗脑衰老相关中药体外评价及细胞移植研究均具有一定的研究意义.
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