【摘 要】
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大田软海绵酸(Okadaic acid,OA)是一种小分子腹泻性贝类毒素,主要中毒症状为腹痛、呕吐、腹泻等.由于其分布较广,中毒事件时有发生,所以开发一种快速、简便、灵敏、可靠
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大田软海绵酸(Okadaic acid,OA)是一种小分子腹泻性贝类毒素,主要中毒症状为腹痛、呕吐、腹泻等.由于其分布较广,中毒事件时有发生,所以开发一种快速、简便、灵敏、可靠的检测方法显得尤为迫切.本研究运用GO-SELEX这一体外筛选技术获得了一条对OA具有高亲和性和特异性的ssDNA适配体,作为构建检测方法的识别分子.配体指数富集系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术可从一个庞大的随机单链寡核苷酸文库中获得适配体分子,包括结合、分离、洗脱、PCR扩增、制备单链等几个步骤,循环进行多轮.其中最关键的步骤是分离,即将靶标一单链寡核苷酸复合物与未结合的游离寡核苷酸分开.通常,筛选小分子物质的适配体需将其固定,但这可能会影响小分子物质的天然构象,进而影响获得的适配体在实际应用中的识别效果.氧化石墨烯(Grapheme oxide,GO)具有吸附单链寡核苷酸的特性,利用氧化石墨烯可构建一种无需固定的GO-SELEX筛选天然状态的小分子物质的适配体.在将OA和随机ssDNA文库孵育后,加入GO,GO会吸附未结合的ssDNA,而OA-ssDNA复合物则保持游离状态,通过离心即可将两者分离.最终经过13轮筛选,获得了一条能特异性识别OA的适配体,其Kd值达42.42nM,表明其亲和性很强.
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