【摘 要】
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单增李斯特菌inlB基因是一种重要且特有的毒力基因,本实验旨在针对inlB基因展开食品中单增李斯特菌的快速检测方法的研究.本文首先针对毒力基因inlB设计20对引物,并用荧
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单增李斯特菌inlB基因是一种重要且特有的毒力基因,本实验旨在针对inlB基因展开食品中单增李斯特菌的快速检测方法的研究.本文首先针对毒力基因inlB设计20对引物,并用荧光定量PCR方法筛选出特异性好的一对引物用于后续实验.为了检验荧光定量PCR的可行性,人工污染样品即食鲍鱼,继而分别提取纯培养单增李斯特菌液和人工污染样品即食鲍鱼菌液的DNA,分别以DNA 10倍梯度稀释液为模板,建立荧光定量PCR快速检测体系,得到荧光定量PCR方法的特异性、敏感性、标准曲线等评价指标,其中实验得到相关系数(R2)分别为为0.997和0.994,扩增效率分别为101.2％和102.3％.在纯培养和人工污染的鲍鱼样本中检出限分别可达57cfu/mL和115cfu/mL.对市场随机抽取的150份新鲜水产品样品进行检测,荧光定量PCR法检测出7份样品含有单增李斯特菌,用国标法(GB 4789.30-2010)验证结果表明与荧光定量PCR的检测结果一致.因此荧光定量PCR的方法被认为是快速和灵敏的,并可应用于食品检测中.
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