【摘 要】
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目的：建立一个基于哺乳动物单杂交的报告基因的细胞瞬时转染的ER调节剂高通量筛选模型。 方法：利用RT-PCR技术从脂肪的总RNA中扩增Erα基因配体结合区(ligand bingding doma
【机 构】
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河北师范大学生命科学学院河北石家庄050016
【出 处】
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2008中国药学会学术年会暨第八届中国药师周
论文部分内容阅读
目的：建立一个基于哺乳动物单杂交的报告基因的细胞瞬时转染的ER调节剂高通量筛选模型。
方法：利用RT-PCR技术从脂肪的总RNA中扩增Erα基因配体结合区(ligand bingding domain Erα LBD)序列,构建表达载体pBind-Erα的嵌合表达载体。与含GAL4相 应元件的报告质粒共转染细胞系,通过检测荧光素酶基因的表达状况评价化合物对Erα的调节活性。
结果：成功构建pBind-Erα表达质粒，并且通过报告质粒与表达质粒之间的比例和宿主细胞条件的优化,得到了最佳的共转染条件。在该模型上激动剂阳性药雌二醇能剂量依赖地提高荧光素酶的表达,最大上调倍增数超过25倍；拮抗剂阳性药它莫昔芬能有效地拮抗雌二醇的活性，最大拮抗活性可达8倍。此外该模型被微量化为384孔板。
结论：ER调节剂的筛选模型灵敏、稳定,可以快速进行多种来源的化合物药物的筛选。
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