抗AFB1和抗总AFT单克隆抗体的制备及其特性

来源 :中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第一届中国兽医临床大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:greenecho
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用黄曲霉毒素B1(AFB1)与羧甲基羟胺半盐酸盐在吡啶中反应生成黄曲霉毒素B1肟(AFB1O),再用活性酯法将AFB1O与载体蛋白偶联合成完全抗原。经检测,AFB1的肟化率和AFB1O的利用率分别为84.3%和55.4%。用人工抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/O-Agl4)融合,用iELISA联合IDC—ELISA筛选出产生针对AFB1抗体的杂交瘤细胞。经3次亚克隆和稳定性试验进一步筛选,共获得8株特异性较好的杂交瘤细胞,分别制备腹水并对其特性进行鉴定。8株单抗对赭曲霉毒素A、赭曲霉毒素B、玉米赤霉烯酮、伏马菌素的交叉反应性均小于0.1%。对5种黄曲霉毒素(B1、B2、G1、G2和M1)的交叉反应性有所差别,其中2-6A8和2-B1单抗对AFB1特异性相对较好,对5种黄曲霉毒素的交叉反应率分别为(%)100、16.5、10.8、4.2、0.5和100、12.6、31.5、12、0.8,可主要用于AFB1的检测;2-A5和2-B5单抗与5种AFT有较强的交叉反应,分别为(%)100、75、102.1、151.2、25.4和100、89.4、125.1、104、60.6,可用于总黄曲霉毒素的检测。以1—5G4和2-6A8两株单抗建立了IDC-ELISA检测方法,其检测下限分别低于0.1ng/ml和0.5ng/ml。
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