【摘 要】
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目的 以小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)为对象,研究ROS在HVJ-E对B16F10的体内外溶瘤作用中的作用机制,为揭示仙台病毒的抗肿瘤机制提供借鉴。方法 通过FACS(探针DCFH-DA)检测细胞中活性氧的产生水平、倒置显微镜观察细胞形态、CCK-8法测定细胞活力、FACS (Annexin V/PI双染法)检测细胞凋亡、Western blotting方法检测凋亡相关蛋白的表达情况,最后通过建
【机 构】
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扬州大学兽医学院,扬州225009
【出 处】
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华东地区第十四届实验动物科学学术交流会
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目的 以小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)为对象,研究ROS在HVJ-E对B16F10的体内外溶瘤作用中的作用机制,为揭示仙台病毒的抗肿瘤机制提供借鉴。方法 通过FACS(探针DCFH-DA)检测细胞中活性氧的产生水平、倒置显微镜观察细胞形态、CCK-8法测定细胞活力、FACS (Annexin V/PI双染法)检测细胞凋亡、Western blotting方法检测凋亡相关蛋白的表达情况,最后通过建立小鼠黑色素瘤动物模型来进行体内作用研究。结果 HVJ-E能够引起B16F10细胞中ROS水平的增加,同时能够引起B16F10细胞形态学变化、细胞活力下降、凋亡率上升,并且呈剂量-效应关系；随着病毒浓度的增加,p53、Bax、Cleaved Caspase-3、PARP蛋白表达逐渐增强,Bcl-2蛋白表达逐渐减弱；NAC预处理能够抑制HVJ-E引起的细胞活力的下降、能够抑制HVJ-E致B16F10细胞凋亡率、能够抑制细胞活性氧水平的增加,同时也能够抑制HVJ-E引起的细胞中p53、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达的增加以及Bcl-2蛋白表达的下降；体内研究中,NAC能够抑制HVJ-E引起的肿瘤体积生长速度的下降,同时也能够抑制HVJ-E引起的小鼠黑色素瘤中p53、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达的增加以及Bcl-2蛋白表达的下降。结论 ROS的确参与了HVJ-E致B16F10细胞凋亡的过程,且在信号通路的上游发挥调控作用。即ROS的过量产生引起DNA的氧化损伤,激活p53蛋白,从而引起下游凋亡相关蛋白的表达,最终导致细胞凋亡。
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