论文部分内容阅读
目的 研究钙结合蛋白(HRC)对肝癌细胞增殖和凋亡的作用及其分子机制.方法 构建HRC基因的过表达质粒和小干扰RNA (siRNA)序列,分别转染SMMC-7721和Sk-hep-1肝癌细胞,RTPCR和Western印迹法检测其过表达和静默效率,细胞增殖和活性检测试剂盒(CCK-8法)和5-Ethynyl-2-deoxyuridine(EdU)法检测HRC过表达(或静默)后肝癌细胞的增殖情况,流式细胞仪分析HRC过表达(或静默)对肝癌细胞凋亡的影响,Western印迹法检测增殖和凋亡相关通路蛋白表达水平.建立人肝癌细胞(SMMC-7721-HRC和SMMC-7721)裸鼠移植瘤模型,观察两组裸鼠肿瘤的生长情况.结果 HRC过表达的SMMC-7721细胞增殖能力增强,而HRC静默的Sk-hep-1细胞增殖受到抑制(P＜0.05).SMMC-7721细胞实验组(转染pcDNA3.1-HRC)细胞凋亡率为(6.18±0.19)％,低于对照组(转染pcDNA3.1)细胞的(22.03±1.07)％(P＜0.05).Sk-hep-1细胞实验组(转染HRC-siRNA)细胞凋亡率为(17.06±0.23)％,较对照组(转染siRNA)细胞的(8.23±0.27)％显著增加(P＜0.05).SMMC-7721-HRC实验组裸鼠肿瘤体积较SMMC-7721组明显增大(P＜0.05).HRC过表达的SMMC-7721细胞中磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶(p-MEK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)和Cyclin E1表达增加,而C/EBP同源蛋白(CHOP)、转录激活因子4(ATF4)和葡萄糖调节蛋白78(Grp78)表达明显降低；HRC静默的Sk-hep-1细胞中p-MEK、p-ERK与Cyclin E1表达降低,而CHOP、ATF4和Grp78表达均明显增加；且MEK/ERK信号通路抑制剂U0126预处理SMMC-7721细胞后,HRC促肝癌细胞增殖作用消失；siRNA干扰Sk-hep-1细胞中ATF4、CHOP表达后,HRC抗肝癌细胞凋亡作用明显减弱.结论 HRC可促进肝癌细胞增殖,拮抗其凋亡,其机制可能通过上调MEK/ERK信号通路和下调ATF4-CHOP诱导的内质网应激实现.