BCB染色液对绵羊不同直径卵泡卵母细胞的筛选作用

来源 :第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fkj1022
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本试验以屠宰场绵羊卵巢为材料,采用抽吸法收集卵泡直径小于2mm、2-5mm、大于5mm卵母细胞,置于26μM/L的BCB染色液中避光染色90min,将卵母细胞质呈蓝色的设为BCB十卵母细胞,未着色的设为BCB+卵母细胞,体外成熟24h,用0.1%透明质酸酶去除卵丘细胞,再用含5μM/L离子霉素的激活液中激活4min,然后移入含6-DMAP的培养液内培养2h,最后,移入含有600-700μM/L体外培养液的四孔培养板中培养。取第7d的囊胚,进行囊胚Hoechst细胞染色,然后在倒置显微镜的紫外光下进行细胞计数。研究表明:小于2mm组卵母细胞可能由于体内某种物质储备不足,核成熟可以达到,但后期胚胎的发育能力会受到限制,大于5mm卵泡直径的卵母细胞,受精卵基本都能发育到桑胚或囊胚。通过卵泡直径的分类和BCB染色法的结合,可以有效筛选出卵泡直径大于2mm卵母细胞适合体外培养,并且大于2mmBCB+组卵母细胞后期发育潜能更强。
其他文献
构建含有组织特异性启动子的载体,能够实现使外源基因在特定的组织中特异表达;将具有相同或相似功能的转录调控元件结合起来应用,可增强天然启动子的活性.本研究采用肌肉特异性表达基因myf61422bp的启动子(由本课题组保存)序列替换pEGFP-N1的CMV启动子,MyoD CDS序列作为外源基因,构建肌肉特异性表达载体,并且在myf6启动子之前引入SV40增强子,以提高组织特异性表达,在细胞水平验证外
PiggyBac转座子是高效的转基因研究工具,可将外源基因插入到基因组中的TTAA位点,可携带高达150kb进行转座且转基因效率高达10%.本文构建了基于PiggyBac转座子的转基因载体PB-rtTA-NIT-STP,并在小鼠ES细胞系中对载体功能进行验证.该载体含有四环素诱导的tet-on系统调控的SV40T和p53基因、与tet-on系统结合的rtTA转录因子以及用于正负向筛选的LoxP-n
本试验将人干扰素α-2b (IFNα-2b)基因cds序列进行密码子优化,将其中在小鼠和牛中稀有的密码子替换为常用密码子,然后将改造后的序列连接到pBC1表达载体的克隆位点上,通过原核注射法将线性化的重组表达载体pBC1/IFNα-2b注入FVB小鼠系受精卵,并获得了3只转基因小鼠.
通过构建猪MR-1(pMR-1)基因表达载体,经转染试剂LipofectamineTM转染小鼠胚胎干细胞P23进行表达分析,制作转pMR-1小鼠模型,为研究鉴定MR-1基因调控肌肉纤维生长发育的生物学功能,进而为转MR-1基因猪的制作提供理论依据.
构建了双荧光慢病毒载体,制备出效价达7.9×109TU/ml的慢病毒颗粒,4pl病毒注射2细胞期猪早期胚胎,获得3头F0代仔猪,其中1头转基因阳性母猪配种产仔2胎,共获23头F1代仔猪,转基因阳性个体占11头,检测到DsRed与Venus基因的表达.结果表明:利用高效价慢病毒注射早期胚胎,可高效地制备出转基因猪,外源基因能够稳定遗传和表达.
过去研究表明,Leptin基因在糖尿病相关的血糖和脂肪代谢通路中起到重要作用,leptin突变小鼠模型被广泛用于肥胖疾病相关的药物测试.新的研究发现已有的leptin突变小鼠模型在患者临床糖尿病药物试验中,未能反映出治疗药物诱发心脏病的副作用.小型猪作为模型动物,与人类的脂肪积累方式和药物敏感度更接近.因此为了建立更适合人类肥胖症的疾病模型,本研究以小型猪为模式动物进行leptin基因敲除.本研究
利用显微操作技术进行的动物体细胞核移植方法不仅是研究胚胎重编程机理、转基因工程的常规手段之一,也是地方物种保护,培育新系家畜提供了重要的实验技术平台.现在世界范围内普遍存在核移植效率低下等问题,为了优化并建立适合广西德宝黑猪体细胞核移植体系,本研究探讨了不同的融合和电激活的参数,化学激活药剂,融合激活方案,供体等因素对核移植效率的影响,并探讨了重构胚培养中添加适宜浓度和处理时间的抗氧化剂Vitam
本实验采用来源于南宁市屠宰场收集的猪卵巢的卵母细胞,于25350C生理盐水送至实验室,用带有18G针头的注射器抽取卵泡直径为3~6mm的卵泡,经沉淀后收集有3层颗粒细胞包被的卵丘卵母细胞复合体,于成熟液中经体外成熟42-44h后,收集有第一极体的成熟卵母细胞用于实验。供体细胞选用两周龄广西纯种德保黑猪第5~8代耳成纤维细胞。本实验采用四组对照实验不同浓度的5-Aza-CdR处理广西纯种德保黑猪耳成
Jasplakinolide(JAS)是一种促进微丝聚合和稳定的药物.本研究在牛卵母细胞成熟培养过程中用JAS进行处理,分析其对孤雌发育和体细胞克隆胚胎的发育的影响.结果显示,JAS处理的卵母细胞孤雌激活后的卵裂率和囊胚率均显著低于对照组.用100nM JAS处理的卵母细胞构建的克隆胚,其卵裂率与对照组无显著性差异,但是囊胚率显著低于对照组.结果表明,JAS处理成熟过程中的卵母细胞不利子卵子其后的
microRNA是一类21~25nt大小的单链非编码RNA,在生物体内广泛存在,并调节基因表达.miRNA表达分析和功能探索在转基因生物领域中成为热点问题.利用荧光定量技术比较正常牛、克隆牛和转基因牛的心、肝、脾、肺、肾、胎盘、子叶、子宫内膜中miR-483和miR-486的表达水平.结果显示miR-483和miR-486在正常牛、克隆牛和转基因牛的组织中均有表达,其中在心脏中表达量显著高于其他组