【摘 要】
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本实验采用来源于南宁市屠宰场收集的猪卵巢的卵母细胞，于25350C生理盐水送至实验室，用带有18G针头的注射器抽取卵泡直径为3～6mm的卵泡，经沉淀后收集有3层颗粒细胞包被的卵丘卵母细胞复合体，于成熟液中经体外成熟42-44h后，收集有第一极体的成熟卵母细胞用于实验。供体细胞选用两周龄广西纯种德保黑猪第5～8代耳成纤维细胞。本实验采用四组对照实验不同浓度的5-Aza-CdR处理广西纯种德保黑猪耳成
【机 构】
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广西大学亚热带生物资源保护利用国家重点实验室 广西壮族自治区畜牧研究所,南宁,530005
【出 处】
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第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会
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本实验采用来源于南宁市屠宰场收集的猪卵巢的卵母细胞，于25350C生理盐水送至实验室，用带有18G针头的注射器抽取卵泡直径为3～6mm的卵泡，经沉淀后收集有3层颗粒细胞包被的卵丘卵母细胞复合体，于成熟液中经体外成熟42-44h后，收集有第一极体的成熟卵母细胞用于实验。供体细胞选用两周龄广西纯种德保黑猪第5～8代耳成纤维细胞。本实验采用四组对照实验不同浓度的5-Aza-CdR处理广西纯种德保黑猪耳成纤维细胞(72h)，观察记录其生长曲线变化情况，并用四组处理后成纤维细胞作为供体与去核猪卵母细胞融合进行手工克隆，记录其对后期胚胎发育率、囊胚细胞数和DNA甲基化程度的影响。研究表明：高浓度5-Aza-CdR对德保黑猪成纤维细胞具有抑制作用。2,3,4组相对于1组均有不同程度的畸变、生长抑制甚至致死。用处理后成纤维细胞作供体，猪手工克隆重构胚体外发育的卵裂率(24h.48h)和桑堪胚率各组间差异不显著(P>0.05)。
其他文献
本研究利用TALEN技术成功获得了GGTA1基因敲除克隆猪。与常规的基因打靶技术相比，利用TALEN技术介导的基因敲除效率在单细胞水平可以达到20％-26%之间，而常规同源重组的基因打靶效率仅在10-6～10-7,并且通过一次转染，可以实现一次性双等位基因的敲除，这在常规基因打靶中是无法实现的，这样极大缩短了基因敲除纯合子的培育时间，为生产基因敲除动物提供了极大的便利。另外，利用TALEN技术介导
体外获取的卵母细胞其周围包括的卵丘细胞数量不一，传统上将胞质均匀的卵母细胞复合体按卵丘细胞层数分为三类:A类周围有5层以上卵丘细胞包被;B类周围有5层以下，1层以上卵丘细胞包被;C类仅有单层卵丘细胞或无卵丘细胞包被。在卵母细胞培养中，一般C类COCs弃之不用，而B类一直未有定论，而在生产操作中，一般将COCs分为两类，胞质均与包被三层以上的定义为优级卵，三层以下一层以上的定义为次级卵，本研究就此探
本文以绵羊为研究对象，用切剖法获得卵母细胞，收集卵丘细胞一卵母细胞复合体，进行成熟培养。COCs体外成熟19h后，去除周围卵丘细胞并将其离心洗涤，培养2代后用含有不同浓度Scriptaid的培养液进行接触抑制处理，然后用0.25％胰蛋白酶消化处理2-3min，用移液枪吹打成单个细胞。将卵母细胞在显微操作仪下去除第一机体及周围的少量胞质，并注入卵丘细胞，进行融合。随后置于培养液中培养3h后观察融合结
构建含有组织特异性启动子的载体,能够实现使外源基因在特定的组织中特异表达;将具有相同或相似功能的转录调控元件结合起来应用,可增强天然启动子的活性.本研究采用肌肉特异性表达基因myf61422bp的启动子(由本课题组保存)序列替换pEGFP-N1的CMV启动子,MyoD CDS序列作为外源基因,构建肌肉特异性表达载体,并且在myf6启动子之前引入SV40增强子,以提高组织特异性表达,在细胞水平验证外
PiggyBac转座子是高效的转基因研究工具,可将外源基因插入到基因组中的TTAA位点,可携带高达150kb进行转座且转基因效率高达10％.本文构建了基于PiggyBac转座子的转基因载体PB-rtTA-NIT-STP,并在小鼠ES细胞系中对载体功能进行验证.该载体含有四环素诱导的tet-on系统调控的SV40T和p53基因、与tet-on系统结合的rtTA转录因子以及用于正负向筛选的LoxP-n
本试验将人干扰素α-2b (IFNα-2b)基因cds序列进行密码子优化,将其中在小鼠和牛中稀有的密码子替换为常用密码子,然后将改造后的序列连接到pBC1表达载体的克隆位点上,通过原核注射法将线性化的重组表达载体pBC1/IFNα-2b注入FVB小鼠系受精卵,并获得了3只转基因小鼠.
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构建了双荧光慢病毒载体,制备出效价达7.9×109TU/ml的慢病毒颗粒,4pl病毒注射2细胞期猪早期胚胎,获得3头F0代仔猪,其中1头转基因阳性母猪配种产仔2胎,共获23头F1代仔猪,转基因阳性个体占11头,检测到DsRed与Venus基因的表达.结果表明:利用高效价慢病毒注射早期胚胎,可高效地制备出转基因猪,外源基因能够稳定遗传和表达.
过去研究表明,Leptin基因在糖尿病相关的血糖和脂肪代谢通路中起到重要作用,leptin突变小鼠模型被广泛用于肥胖疾病相关的药物测试.新的研究发现已有的leptin突变小鼠模型在患者临床糖尿病药物试验中,未能反映出治疗药物诱发心脏病的副作用.小型猪作为模型动物,与人类的脂肪积累方式和药物敏感度更接近.因此为了建立更适合人类肥胖症的疾病模型,本研究以小型猪为模式动物进行leptin基因敲除.本研究
利用显微操作技术进行的动物体细胞核移植方法不仅是研究胚胎重编程机理、转基因工程的常规手段之一,也是地方物种保护,培育新系家畜提供了重要的实验技术平台.现在世界范围内普遍存在核移植效率低下等问题,为了优化并建立适合广西德宝黑猪体细胞核移植体系,本研究探讨了不同的融合和电激活的参数,化学激活药剂,融合激活方案,供体等因素对核移植效率的影响,并探讨了重构胚培养中添加适宜浓度和处理时间的抗氧化剂Vitam