【摘 要】
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目的:揭示CypB在ORFV早期感染过程中的变化规律及作用,进而阐明CypB对ORFV早期感染过程的调控机制。方法:利用Real-time PCR及Western-blot方法分别从基因水平和蛋白水平对OR
【出 处】
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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会
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目的:揭示CypB在ORFV早期感染过程中的变化规律及作用,进而阐明CypB对ORFV早期感染过程的调控机制。方法:利用Real-time PCR及Western-blot方法分别从基因水平和蛋白水平对ORFV早期感染阶段CypB表达的变化进行监测;分别构建CypB过表达载体及RNAi载体,利用Real-time PCR及LAMP-PCR方法监测ORFV早期复制基因(DNA聚合酶基因)的表达变化规律,探索宿主细胞CypB蛋白的上调表达及下调表达对ORFV早期复制和增殖的影响。结果:以MOI＝3病毒量进行接种,在接种后的前8 h,无论是基因水平还是蛋白水平,CypB的表达量都呈显著升高趋势,而在此之后直至第24 h,CypB的表达量则呈逐渐下降趋势。此外,目前已成功构建了CypB过表达载体EGFP-N-CypB,间接免疫荧光检测结果显示,EGFP-N-CypB能够成功在宿主细胞内过量表达CypB.结论:根据CypB在ORFV感染后前8 h的表达变化规律,初步推测CypB在ORFV早期感染复制过程中发挥重要作用,之后还需要通过对ORFV早期感染过程中DNA聚合酶基因变化规律的监测进一步加以证实。目前已成功构建EGFP-N-CypB过表达载体,但为充分证实CypB对ORFV增殖复制的影响,仍需构建CypB的RNAi载体加以验证,揭示CypB在ORFV早期感染过程中的变化规律及作用,进而阐明CypB对ORFV早期感染过程的调控机制。
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