【摘 要】
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为建立适用于钟萼木的ISSR(Inter-Simple Sequence Repeat,ISSR)反应体系,采用单因素法筛选出影响ISSR-PCR的主要因素的最适宜值,建立了优化的钟萼木ISSR-PCR反应体系和扩增
【机 构】
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福建农林大学林学院,福州350002福州植物园,福州350000福建省闽江源国家级自然保护区,建宁354500
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为建立适用于钟萼木的ISSR(Inter-Simple Sequence Repeat,ISSR)反应体系,采用单因素法筛选出影响ISSR-PCR的主要因素的最适宜值,建立了优化的钟萼木ISSR-PCR反应体系和扩增程序.结果表明,优化的反应体系为:反应体积20 μ1,Mg2+(10 mmol/L)2 mmol/L,引物(10 μmol/L)0.5μmol/L,dNTP(10 mmol/L)0.6 mmol/L,模版DNA(20 ng/μl)16 ng,Taq酶(5U/μl) 1.5 U,用灭菌的双蒸水补齐.优化的扩增体系为:94℃预变性5 min,然后进入38个循环,94℃变性45 s,52～56℃(各引物退火温度不同)退火60 s,72 ℃延伸90 s,循环完毕后于72℃延伸10 min,最后保存于4℃.
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