【摘 要】
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目的：研究血管内皮细胞对3日龄新生鼠脑神经干细胞增殖分化的影响及机制，为早产儿脑损伤的治疗提供理论依据。方法：采用3日龄新生鼠脑室下区(subventricularzone，SVZ)脑片培养模型，随机分为三组：共培养组(血管内皮细胞+脑片共培养)、共培养加siRNA干预组(血管内皮细胞+脑片+VEGF siRNA)、对照组(仅培养脑片).脑片分别培养至第4d、7d、10d，采用荧光标记抗体和免疫组
【机 构】
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复旦大学附属儿科医院 200032;卫生部新生儿疾病重点实验室
【出 处】
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中华医学会第五次全国儿科中青年学术交流大会
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目的：研究血管内皮细胞对3日龄新生鼠脑神经干细胞增殖分化的影响及机制，为早产儿脑损伤的治疗提供理论依据。
方法：采用3日龄新生鼠脑室下区(subventricularzone，SVZ)脑片培养模型，随机分为三组：共培养组(血管内皮细胞+脑片共培养)、共培养加siRNA干预组(血管内皮细胞+脑片+VEGF siRNA)、对照组(仅培养脑片).脑片分别培养至第4d、7d、10d，采用荧光标记抗体和免疫组化的方法，观察血管内皮细胞分泌因子对神经干细胞增殖，及其向神经元、星形胶质细胞以及少突胶质细胞分化的影响；并通过基因芯片技术，分析在此过程中血管新生与神经新生相关基因表达谱的变化，探讨其作用途径与机制。
结果：1.共培养组神经干细胞(Nestin+)数目(个，测量框)增加，7d达高峰(60.2±6.1)，与同时点对照组(32.2±3.1)、siRNA组(48.7±5.9)相比，差异非常显著(P<0.01)；神经元(Tujl+)、星形胶质细胞(GFAP+)和少突胶质细胞(04+)数目亦明显增加，10d达高峰(分别为1 12.4±10.2、72.1±6.9、70.1 4-7.6)，与同时点对照组(分别为65.8±7.1、42.1±4.4、37.84±3.2)、siRNA组(分别为92.6±9.7、58.2±6.1、57.3±5.4)相比，差异非常显著(P<0.01)。2.血管新生和神经新生两种基因芯片检测结果显示：共培养组共有112个基因表达较对照组2倍以上升高，给予siRNA干预后，这112个上调的基因中有81个表达呈2倍以上降低。利用KEGG数据库将这些差异表达基因按照信号通路进行分类，发现差异表达基因主要涉及Notch、Wnt、Shh、Pten和Vegf信号通路，这些信号传导通路与血管新生和神经干细胞增殖分化的调控有关。
结论：1.血管内皮细胞分泌的可溶性细胞因子可促进神经干细胞的增殖分化，而对血管新生相关基因的抑制能够影响神经干细胞的增殖分化；2.血管内皮细胞影响神经干细胞增殖分化的机制复杂，可能主要通过调控Notch、Wnt、Shh、Pten和vegf信号通路发挥作用。
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