【摘 要】
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采用硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel,DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析、SP-Sepharose阳离子交换柱层析和Sephacryl S-200凝胶过滤柱层析,从青石斑鱼(Epinephelus awoara)的胃
【机 构】
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集美大学生物工程学院,福建 厦门 361021
【出 处】
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中国食品科学技术学会第八届年会暨第六届东西方食品业高层论坛
论文部分内容阅读
采用硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel,DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析、SP-Sepharose阳离子交换柱层析和Sephacryl S-200凝胶过滤柱层析,从青石斑鱼(Epinephelus awoara)的胃中分离纯化到三种胃蛋白酶原(PG-1、PG-2和PG-3),SDS-PAGE结果显示,它们的分子量分别为35、36和37 kDa.在pH 2.0下,三种胃蛋白酶原转化为有活性的胃蛋白酶P-1、P-2和P-3,分子量分别约为33、33和34kDa.三种酶的最适pH分别为3.0、2.5和2.5,最适温度均为40℃,且均能被典型的天冬氨酸蛋白酶抑制剂pepstatin A有效抑制.免疫交叉反应结果表明,三种胃蛋白酶原能与大鼠抗黄鳍鲷PG-Ⅰ,PG-Ⅱ,PG-3b,PG-3a,PG-4a及PG-4b多克隆抗体发生不同程度的免疫交叉反应.动力学参数测定结果表明,P-1、P-2和P-3对酸变性牛血红蛋白的Km、kcat及kcat/Km值分别为7.0×10-5 M,17.6 s-1,2.5×105 M-1·s-1；5.5×10-5M, 22.8 s-1,4.1×105 M-1·s-1和5.2×10-5 M, 18.7 s1,3.6×105 M-1·S-1.
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