【摘 要】
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构建金黄色葡萄球菌FnBPA(纤连蛋白结合蛋白)的两种原核表达载体,制备其单克隆抗体(mAb)并对其特异性进行鉴定.筛选FnBPA的抗原表位富集区,优化基因序列,分别构建FnBPA-pGEX4
【机 构】
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南京军区军事医学研究所,南京210002
【出 处】
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江苏省生物化学与分子生物学第九届会员代表大会暨第十次学术会议
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构建金黄色葡萄球菌FnBPA(纤连蛋白结合蛋白)的两种原核表达载体,制备其单克隆抗体(mAb)并对其特异性进行鉴定.筛选FnBPA的抗原表位富集区,优化基因序列,分别构建FnBPA-pGEX4T-2和FnBPA-pET28a(+)两种表达载体,纯化目的蛋白FnBPA-GST和FnBPA-His.以纯化FnBPA-GST为抗原免疫Balb/c小鼠,采用常规融合技术制备杂交瘤细胞,通过有限稀释法获得单克隆细胞株.以纯化的FnBPA-His为检测抗原,采用间接ELISA法、Western Blot筛选和鉴定阳性杂交瘤细胞株.杂交瘤细胞注射小鼠腹腔制备腹水抗体,采用protein G Resin进行纯化.成功构建两种重组表达质粒FnBPA-pGEX4T-2和FnBPA-pET28a(+),筛选获得了高表达工程菌,纯化后获得高纯度目的蛋白.获得稳定分泌单克隆抗体的细胞株,制备的腹水效价大于2x105,腹水纯化后获得纯度大于95％的特异性抗体.单克隆抗体的制备为金黄色葡萄球菌检测方法的建立奠定了良好的基础.
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